T4455

Protease de TEV

• Sinônimo(s): P1 protease, TEVp, Tobacco Etch Virus protease, rTEV
• Código UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.54

Propriedades

• fonte biológica: microbial (Tobacco Etch virus)
• Nível de qualidade: 200
• recombinante: expressed in E. coli
• descrição: Contains both a histidine tag and a GST tag
• forma: solution
• atividade específica: ≥3,000 units/mg protein
• peso molecular: 27 kDa
• técnica(s): protein purification: suitable
• adequação: suitable for purification of HIS tagged recombinant proteins
• aplicação(ões): genomic analysis
• Condições de expedição: wet ice
• temperatura de armazenamento: −20°C

Descrição

Descrição geral

A protease de TEV tem um domínio catalítico de protease (NIa) que corresponde a um peso molecular de 27 kDa. Ele é único, altamente específico e ativo em baixa temperatura.

A protease do vírus Etch do tabaco (TEV) é uma ferramenta útil para a remoção de marcadores de fusão de proteínas recombinantes.

Aplicação

A protease de TEV foi usada na remoção da etiqueta de histidina da proteína quinase ativada por mitógeno recombinante 14 (MAPK14), fragmento C-terminal da conexina 43 (Cx43) e δ1-pirrolino-5-carboxilato redutase de Oryza sativa. Também foi usada na eluição de proteassomas purificados de linhagens celulares K562 da leucemia humana.

Ações bioquímicas/fisiológicas

A protease de TEV imobilizada em estreptavidina-agarose é uma ferramenta eficiente para a clivagem de proteínas de fusão. A protease de TEV também foi usada em um estudo para investigar o processamento proteolítico de nlrp1b para a atividade de inflamassomas.

A protease do vírus Etch do tabaco (TEV) sofre autólise, porém as proteases de TEV mutantes são resistentes à autólise. A expressão bacteriana da protease de TEV recombinante leva a baixos rendimentos e menor solubilidade. O uso da fusão da proteína fluorescente verde com a protease de TEV supera essas desvantagens e tem aplicação em pesquisa de genômica estrutural.

A TEV protease tem uma sequência de reconhecimento de clivagem de 7 aminoácidos extremamente específica de Glu-Asn-Leu-Tir-Fen-Gln↓Gli/Ser.

Características e benefícios

Desenvolvida e purificada de modo ideal para maior estabilidade e alta atividade específica em uma ampla faixa de temperatura.

propriedades físicas

A TEV protease é um domínio catalítico modificado da Nla protease do vírus Etch do tabaco. A TEV protease é uma protease de cisteína altamente específica pertencente à família C4 de peptidases.

Um construto de protease de TEV de 52 kDa modificado contendo as etiquetas GST e His para fácil remoção usando glutationa ou meio de afinidade His-Select^®.

Definição da unidade

Uma unidade de protease de TEV cliva >85% de 3 μg de substrato de controle em uma hora em pH 8,0 a 30 °C.

forma física

Fornecida em uma concentração >=2 mg/ml em Tris-HCl 25 mM, pH 8,0, NaCl 50 mM, TCEP 1 mM e glicerol 50%

solução aquosa de glicerol

Nota de preparo

Protocolo de clivagem
Prepare um tampão de diálise fresco. O tampão de diálise deve ser otimizado para solubilidade da proteína-alvo e não conter inibidores de protease. O tampão de diálise também deve ser compatível com processos de purificação a jusante como, por exemplo, quantidade mínima de EDTA ou DTT, se uma coluna HIS Select^® for usada para remover a etiqueta His clivada.
Exemplo de tampão de diálise adequado; Tris-HCl 25 mM, pH 8,0, NaCl 150-500 mM, β-mercaptoetanol 14 mM
Esta protease de TEV tem a mesma atividade em NaCl 150 mM ou NaCl 500 mM e imidazol 400 mM.
Diluir a amostra de proteína-alvo para 1-2 mg/ml com tampão de diálise. Isso é opcional no caso de a proteína-alvo agregar no tampão de diálise. Guarde uma pequena alíquota como controle para análise por PAGE. EDTA pode ser adicionado até a concentração final de 0,5 mM se a proteína-alvo for ser eluída da coluna HIS Select^™ e EDTA for compatível com a proteína-alvo.
Adicione a protease de TEV em uma razão de protease para proteína-alvo de 1:100 (p/p) ou 10.000 unidades (1 mg) de protease de TEV para 100 mg de proteína-alvo. Não é necessário calcular a razão molar. A protease de TEV pode ser adicionada diretamente à proteína-alvo. Não há necessidade de trocar o tampão ou diluir a protease de TEV. A razão ideal deve ser determinada empiricamente. Uma razão de protease para proteína-alvo (p/p) de 1:50 a 1:200 deve fornecer uma faixa efetiva para a maioria das proteínas-alvo.
Dialise contra o tampão de diálise a 4 °C ~ 16 horas. A diálise destina-se a remover o imidazol ou a glutationa se colunas HIS Select^® ou de afinidade por glutationa forem usadas para remover a etiqueta clivada ou a protease de TEV após a clivagem.
Normalmente, 1 mg de protease de TEV cliva >90% de 100 mg de uma proteína de controle a 4 °C em 16 horas.

Informações legais

HIS-Select is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

HiScreen is a trademark of Cytiva

Informações de segurança

• Código de classe de armazenamento: 10 - Combustible liquids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 2
• Ponto de fulgor (°F): Not applicable
• Ponto de fulgor (°C): Not applicable