SCR508

Recombinase TAT-CRE

TAT-CRE Recombinase is a recombinant cell-permeant fusion cre-recombinase protein consisting of TAT sequence, a nuclear localization sequence (NLS) and it is known to catalyze the site specific recombination event between two loxP DNA sites.

• Sinônimo(s): Integrase, Recombinase Cre, cre recombinase
• Código UNSPSC: 12352204
• eCl@ss: 32160405
• NACRES: NA.75

Propriedades

• fonte biológica: Escherichia coli
• Nível de qualidade: 100
• recombinante: expressed in E. coli
• Ensaio: >70% (SDS-PAGE)
• Formulário: liquid
• técnica(s): cell culture | stem cell: suitable
• Condições de expedição: dry ice

Descrição

Descrição geral

A Cre Recombinase é uma enzima do bacteriófago P1 que catalisa a recombinação específica do local entre dois locais de reconhecimento de DNA denominados locais loxP. O local de reconhecimento LoxP consiste em duas repetições invertidas de 13 pb que flanqueiam uma região espaçadora de 8 pb. Como o gene Cre e os locais LoxP não são nativos dos genomas da maioria das espécies, os locais LoxP podem ser projetados e introduzidos em células-alvo e, portanto, usados como um meio de controlar com precisão a expressão de genes in vitro (ou seja, células cultivadas) e in vivo (ou seja, modelos animais).

• Se os locais LoxP estiverem localizados em cromossomos diferentes, a recombinase Cre mediará uma translocação cromossômica.
• Se os locais LoxP estiverem orientados na direção oposta, a recombinase Cre mediará uma inversão do segmento floxado.
• Se os locais LoxP estiverem orientados na mesma direção, a recombinase Cre mediará a exclusão do segmento floxado.

Dessa forma, a colocação dos locais LoxP permite que os genes sejam ativados, reprimidos ou trocados por outros genes.

A EMD ’da Millipore TAT-CRE Recombinase é uma proteína de fusão permeável à célula recombinante que consiste em um peptídeo de translocação de proteína básica derivado do HIV-TAT (TAT), uma sequência de localização nuclear (NLS), a proteína Cre e uma etiqueta de histidina N-terminal (H6) para purificação eficiente da proteína de E. coli.

A EMD ’da Millipore TAT-CRE Recombinase demonstrou ser eficaz na remoção de transgenes virais STEMCCA de células IPS humanas e de camundongos.

Aplicação

A EMD Millipore desenvolveu uma proteína de fusão TAT-CRE Recombinase permeável às células, que pode ser entregue diretamente às células de mamíferos e resulta em altas eficiências de recombinação (75 – 100% em camundongos e cerca de 60% em células humanas). O TAT-CRE é facilmente translocado para células de mamíferos e pode catalisar uma recombinação altamente eficiente. A dose e o tempo de exposição à Cre podem ser controlados com precisão, permitindo assim a titulação cuidadosa da atividade da Cre.

Qualidade

Cada lote de proteína recombinase TAT-CRE é rigorosamente testado com controle de qualidade para os seguintes parâmetros:

• Pureza: banda única em torno de 41 kDa com mais de 70% de pureza proteica em um gel SDS-PAGE
• Atividade funcional: faz a mediação da recombinação de alelos modificados por LoxP em uma linha celular repórter HEK293T-Cre
• Níveis de endotoxina: menos de 1 UE/ug de proteína

Definição da unidade

Um padrão de 100 unidades é definido como a quantidade de TAT-CRE (ug) em 1,0 ml de meio de cultura de tecidos necessária para induzir 50% de expressão de GFP em um ensaio de linha de células repórteres loxp HEK293T.

forma física

A proteína recombinante é fornecida em tampão contendo 50% de glicerol (v/v), 500 mM de NaCl e 20 mM de HEPES em pH 7,4

Armazenamento e estabilidade

Estável por 3 meses a partir da data de recebimento, quando armazenado a -20°C ou -80°C. Após o primeiro descongelamento, centrifugue o frasco e misture suavemente a solução. Alíquota em volumes de trabalho menores e congelar a -20°C ou -80°C. Antes de usar, dilua o TAT-CRE até a concentração adequada com meio de cultura e filtre com um filtro de seringa de 0,2um de baixa ligação proteica (Millipore nº de cat. SLGV 033RS ou SLGV013 SL).

Informações de segurança

• Código de classe de armazenamento: 10 - Combustible liquids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 1