11684795910
Roche
In Situ Kit de detecção de morte celular, fluoresceína
sufficient for ≤50 tests, suitable for detection
Sinônimo(s):
Fluoresceína-5(6)-carboxamidocaproil-(5-[3-aminoalil]uridina 5′-trifosfato), Sal de tetralítio de fluoresceína-12-UTP
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About This Item
Código UNSPSC:
12352200
Produtos recomendados
uso
sufficient for ≤50 tests
Nível de qualidade
fabricante/nome comercial
Roche
técnica(s)
flow cytometry: suitable
aplicação(ões)
detection
temperatura de armazenamento
−20°C
Categorias relacionadas
Descrição geral
Kit para detecção e quantificação de apoptose em nível de célula única, com base na marcação de quebras na fita de DNA (tecnologia TUNEL); análise por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
Métodos amplamente utilizados para determinar apoptose incluem análise de DNA genômico por eletroforese em gel de agarose e ensaios de fragmentação de DNA à base de 3H-timidina e, alternativamente, 5-bromo-2′-desoxi-uridina. Os métodos envolvem a separação do DNA fragmentado de baixo peso molecular do DNA não fragmentado, de maior peso molecular, em determinada população celular. Portanto, esses métodos não fornecem informações sobre o destino de uma célula individual em uma dada população celular ou, especialmente, em cortes de tecido. Alternativamente, células apoptóticas individuais podem ser reconhecidas microscopicamente pelo aspecto característico de condensação da cromatina nuclear e fragmentação, mas esse método é subjetivo e limitado à janela de tempo relativamente estreita quando as alterações morfológicas atingem grau máximo.
O indicador distintivo de apoptose é a degradação do DNA que, nos estágios iniciais, é seletiva das regiões conectoras do DNA internucleossomal. A clivagem do DNA pode gerar talhos (nicks) no DNA dupla-fita e fita simples. Ambos os tipos de quebras podem ser detectados marcando as terminações 3′-OH livres com nucleotídeos modificados (p. ex., biotina-dUTP, DIG-dUTP, fluoresceína-dUTP) em uma reação enzimática. A enzima desoxinucleotidil-transferase terminal (TdT) catalisa a polimerização independente de modelo de desoxirribonucleotídeos na terminação 3′ de DNA dupla-fita e fita simples. Este método também foi chamado de TUNEL (marcação de talhos (“nick”) por dUTP-X mediada por TdT). Alternativamente, grupos 3′-OH livres podem ser marcados usando DNA polimerases pelo mecanismo dependente de modelo chamado de tradução de talhos (“nicks”). Contudo, o método TUNEL é considerado mais sensível e mais rápido.
O indicador distintivo de apoptose é a degradação do DNA que, nos estágios iniciais, é seletiva das regiões conectoras do DNA internucleossomal. A clivagem do DNA pode gerar talhos (nicks) no DNA dupla-fita e fita simples. Ambos os tipos de quebras podem ser detectados marcando as terminações 3′-OH livres com nucleotídeos modificados (p. ex., biotina-dUTP, DIG-dUTP, fluoresceína-dUTP) em uma reação enzimática. A enzima desoxinucleotidil-transferase terminal (TdT) catalisa a polimerização independente de modelo de desoxirribonucleotídeos na terminação 3′ de DNA dupla-fita e fita simples. Este método também foi chamado de TUNEL (marcação de talhos (“nick”) por dUTP-X mediada por TdT). Alternativamente, grupos 3′-OH livres podem ser marcados usando DNA polimerases pelo mecanismo dependente de modelo chamado de tradução de talhos (“nicks”). Contudo, o método TUNEL é considerado mais sensível e mais rápido.
Especificidade
A reação do TUNEL marca preferencialmente as quebras na fita de DNA geradas durante a apoptose. Isso permite a discriminação de apoptose de necrose e das quebras primárias na fita de DNA induzidas por medicamentos citostáticos ou radiação.
Aplicação
O kit de detecção de morte celular in situ, fluoresceína, é uma técnica não radioativa precisa, rápida e simples para detectar e quantificar a morte de células apoptóticas em nível de células únicas por microscopia por fluorescência e detecção quantitativa por citometria de fluxo em células e tecidos. Portanto, o Kit de detecção de morte celular in situ pode ser usado em diversos sistemas diferentes de ensaios.
Exemplo são:
Exemplo são:
- Detecção de células apoptóticas individuais em cortes de tecido congelados e fixados em formalina em pesquisa básica
- Determinação da sensibilidade de células malignas à apoptose induzida por medicamentos na pesquisa oncológica
- Tipagem de células passando por morte celular em populações heterogêneas por procedimentos de coloração dupla
Características e benefícios
- Sensível: O procedimento de marcação direta usando fluoresceína-dUTP reduz a marcação de fundo
- Rápido: O uso de fluoresceína-dUTP permite a análise de amostras diretamente após a reação de TUNEL
- Prático: Nenhum sistema de detecção secundária necessário.
- Preciso: Identificação de apoptose em um nível molecular (quebras na fita de DNA) e identificação de células nos estágios bem iniciais de apoptose
Embalagem
1 kit contendo 2 componentes.
Nota de preparo
Solução de trabalho: Adicione o volume total (50 μl) de solução enzimática aos 450 μl restantes de solução de marcador para obter 500 μl de mistura de reação de TUNEL.
Misture bem para equilibrar os componentes.
Misture bem para equilibrar os componentes.
Outras notas
Somente para fins de pesquisas biológicas. Não é destinado ao uso em procedimentos diagnósticos.
Somente componentes do kit
Nº do produto
Descrição
- Enzyme Solution (TdT)
- Label Solution (fluorescein-dUTP)
Palavra indicadora
Danger
Frases de perigo
Declarações de precaução
Classificações de perigo
Aquatic Chronic 2 - Carc. 1B Inhalation
Código de classe de armazenamento
6.1D - Non-combustible acute toxic Cat.3 / toxic hazardous materials or hazardous materials causing chronic effects
Classe de risco de água (WGK)
WGK 3
Ponto de fulgor (°F)
does not flash
Ponto de fulgor (°C)
does not flash
Certificados de análise (COA)
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