This form of neutrophil elastase is a salt-free preparation and is supplied in an active form with a specific activity of ≥20 units/mg protein. It is not sterile and has not been tested for cell culture applications. To use it in a cell culture assay, sterile filtration is necessary, which may result in some product retention on the filter.
324681
Elastase, menschliches Neutrophil
Elastase, Human Neutrophil, CAS 9004-06-2, is a serine protease that degrades elastin, collagen, and proteoglycans
Synonym(e):
Elastase, menschliches Neutrophil
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About This Item
CAS-Nummer:
MDL-Nummer:
UNSPSC-Code:
12352204
NACRES:
NA.77
Empfohlene Produkte
Qualitätsniveau
Beschreibung
Merck USA index - 14, 3535
Form
lyophilized solid
Spezifische Aktivität
≥20 units/mg protein
Hersteller/Markenname
Calbiochem®
Lagerbedingungen
OK to freeze
Versandbedingung
ambient
Lagertemp.
−20°C
Allgemeine Beschreibung
Elastase, menschliches Neutrophil, CAS-Nr. 9004-06-2, ist eine Serinprotease, die Elastin, Collagen und Proteoglykane abbaut.
Native Elastase von menschlichem Neutrophil. Baut Collagen, Elastin und Proteoglykane ab. Elastase wurde mit der Entstehung von Lungenemphysem und rheumatoider Arthritis in Verbindung gebracht.
Native Elastase von menschlichem Neutrophil. Eine Serinprotease, die Elastin, Collagen und Proteoglykane abbaut. Deren Überexpression wurde mit der Entstehung von Lungenemphysem, rheumatoider Arthritis und zystischer Fibrose in Verbindung gebracht.
Warnhinweis
Toxizität: Standard-Handhabung (A)
Einheitendefinition
Eine Einheit ist definiert als die Menge an Enzym, die 1,0 µmol MeO-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-pNA (Kat. Nr. 454454) pro Minute bei 25 °C und pH 8,0 hydrolisiert.
Physikalische Form
Salzfrei.
Angaben zur Herstellung
Aus Plasma hergestellt, das in zertifizierten Tests für HBsAg und Antikörper gegen HIV und HCV als negativ befunden wurde.
Rekonstituierung
In 50 mM Natriumacetat, pH 5,5, mit 200 mM NaCl oder in anderen wässrigen Puffern rekonstituieren. Das Material ist bei fast neutralem pH-Wert am aktivsten, doch für die Erhaltung der Stabilität nach der Rekonstitution und Vermeidung einer Autolyse sollte ein leicht saurer Puffer (pH 5,5) verwendet werden.
Nach der Rekonstitution in Aliquote aufteilen und für die langfristige Lagerung einfrieren (-20 °C) oder für die kurzfristige Lagerung im Kühlschrank (4 °C) aufbewahren. Saure Stammlösungen sind bei einer Temperatur von 4 °C bis zu 1 Monat und bei einer Temperatur von -20 °C bis zu 1 Jahr haltbar.
Hinweis zur Analyse
Hauptbande mittels SDS-PAGE.
Sonstige Hinweise
Siedle, B., et al. 2002. Biorg. Med. Chem.10, 2855.
Junger, W.G., et al. 1992. Biol. Chem. Hoppe-Seyler 373, 691.
Selak, M.A. 1992. Thromb. Haemost.68, 570.
Baugh, R.J., and Travis, J. 1976. Biochemistry15, 836.
Junger, W.G., et al. 1992. Biol. Chem. Hoppe-Seyler 373, 691.
Selak, M.A. 1992. Thromb. Haemost.68, 570.
Baugh, R.J., and Travis, J. 1976. Biochemistry15, 836.
Rechtliche Hinweise
CALBIOCHEM is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Signalwort
Danger
H-Sätze
Gefahreneinstufungen
Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
Zielorgane
Respiratory system
Lagerklassenschlüssel
11 - Combustible Solids
WGK
WGK 3
Flammpunkt (°F)
Not applicable
Flammpunkt (°C)
Not applicable
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Hi Is this form of neutrophil elastase active and suitable be used directly in a cell assay? And is it sterile ? Mvh Magdalena
1 answer-
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Has this product been tested for the presence of endotoxin?
1 answer-
Unfortunately, this product has not been tested for the presence for endotoxins
Helpful?
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what is the molecular wight of the enzyme ?
1 answer-
Unfortunately, the molecular weight has not been determined for this product. A number of estimates have been reported in the literature. Please see the link below to a publication that may be helpful:
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1016847823175091?via%3DihubHelpful?
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Is this the active form of the enzyme? or does it require activation by cathepsin?
1 answer-
Here are the recommended reconstitution and reaction conditions:
Solubility information:
Reconstitute in 50 mM sodium acetate, pH 5.5, with 200 mM NaCl or in other aqueous buffers. Material is most active near a neutral pH, but to maintain stability upon reconstitution, use in a slightly acidic buffer (pH 5.5) to avoid autolysis.
Following reconstitution, aliquot and freeze (-20°C) for long term storage or refrigerate (4°C) for short-term storage. Acidic stock solutions are stable for up to 1 month at 4°C or for up to 1 year at -20°C.Human Neutrophil Elastase Protocol
1. Dissolve enzyme in reaction buffer: 100 mM Tris-HCl, pH 7.5, 500 mM NaCl.
2. Prepare the substrate stock solution by dissolving Elastase Substrate I (MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-pNA, Cat. No. 324696) at 50 mM in DMSO.
3. Just prior to assay, dilute the substrate stock solution with an equal volume of 200 mM Tris-HCl, pH 8.0. Mix well.
4. Prepare the assay mixture by combining 960 µl of reaction buffer with 40 µl of diluted substrate stock solution.
5. Add enzyme to assay mixture, mix, and incubate at 25°C.
6. Monitor the change in absorbance at 410 nm. Use an ε of 8800 at 410 nm to calculate the hydrolysis of nitroanilide.Helpful?
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