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ChIPAb+-Phospho-Histon H3 (Ser10) – durch ChIP validiertes Antikörper- und Primer-Set

clone CMA312, from mouse, purified by using protein G

• Synonym(e): H3S10P, Histone H3 (phospho S10), H3 histone, family 3A
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.32
• eCl@ss: 32160702
• Clone: CMA312, monoclonal
• Species reactivity: human, plant, vertebrates
• Application: ChIP, WB
• Citations: 7

Eigenschaften

• biological source: mouse
• Quality Level: 100
• clone: CMA312, monoclonal
• purified by: using protein G
• species reactivity: human, plant, vertebrates
• manufacturer/tradename: ChIPAb+, Upstate^®
• technique(s): ChIP: suitable, western blot: suitable
• isotype: IgG
• NCBI accession no.: NM_003493
• UniProt accession no.: P84243
• shipped in: dry ice

Beschreibung

General description

17 kDa

Alle ChIPAb+-Antikörper werden einzeln (jede Charge, jedes Mal) für die Chromatin-Immunpräzipitation validiert. Jedes ChIPAb+-Antikörper-Set enthält Kontrollprimer (jede Charge wurde durch qPCR geprüft), um Ihre IP-Ergebnisse im stellenspezifischen Kontext biologisch zu validieren. Das qPCR-Protokoll und die Primer-Sequenzen werden bereitgestellt, was es Forschenden ermöglicht, ChIP-Protokolle zu validieren, wenn sie unseren Antikörper in ihrem Chromatin-Kontext nutzen. Jedes Set enthält außerdem einen Negativkontrolle-Antikörper, um die Spezifizität der ChIP-Reaktion zu gewährleisten.
Das ChIPAb+-Phospho-Histon-H3(Ser10)-Set enthält den Anti-Phospho-Histon-H3(Ser10)-Antikörper, einen Negativkontroll-Antikörper (aufgereinigtes Maus-IgG) und qPCR-Primer, die eine 166-bp-Region innerhalb des Promotors des humanen GAPDH-Gens amplifizieren. Das Phospho-Histon H3 (Ser10) und die Antikörper für die Negativkontrolle werden in skalierbarer Reaktionsgröße (pro ChIP) geliefert und können verwendet werden, um die Ausfällung von Phospho-Histon-H3(Ser10)-assoziiertem Chromatin funktionell zu validieren.

Immunogen

Das Immunogen war ein synthetisches Peptid, das den Aminosäuren 1–19 von Histon H3 entspricht und bei Ser10 phosphoryliert wurde.

Epitop: a.a. 1–19

Application

Chromatin-Immunpräzipitation:
Im Ultraschallbad behandeltes Chromatin aus unbehandelten oder mit Colcemid behandelten HeLa-Zellen (2 x 10⁶ Zelläquivalente je IP) wurde einer Chromatin-Immunpräzipitation mit entweder 2 μg normalem Maus-IgG oder Anti-Phospho-Histon-H3(Ser10)-Antikörper und dem Magna ChIP G (Katalognr. 17-611) unterzogen. Die erfolgreiche Immunpräzipitation von Phospho-Histon-H3(Ser10)-assoziierten DNA-Fragmenten wurde mittels qPCR unter Verwendung von Kontroll-Primern für unbehandelte und behandelte Chromatin-Proben verifiziert (siehe Abbildungen). Die Daten werden als prozentuale Eingabe jeder IP-Probe relativ zur Chromatin-Eingabe für jedes Amplikon und jede ChIP-Probe wie angegeben dargestellt.
Nähere Informationen zu den Experimenten entnehmen Sie bitte dem Protokoll für EZ-Magna G ChIP (Katalognr. 17-409) oder EZ-ChIP (Katalognr. 17-371).

Western-Blot-Analyse:
Rekombinante Histon-H3- oder Säureextrakte aus mit Colcemid behandelten HeLa-Zellen(1 μg) wurden durch Elektrophorese aufgelöst, auf PVDF-Membran übertragen und mit 1 μg/ml Anti-Phospho-Histon H3 (Ser10), Klon CMA312, getestet. Die Proteine wurden mit einem an HRP konjugierten Anti-Maus-Sekundärantikörper der Ziege und einem Chemilumineszenz-Nachweissystem visualisiert (siehe Abbildungen).

Dieses praktische Set aus ChIP-validiertem ChIPAb+-Phospho-Histon-H3(Ser10)-Antikörper und Primer enthält den Antikörper und die spezifischen Kontroll-PCR-Primer.

Forschungskategorie
Epigenetik und Zellkernfunktion

Forschungsunterkategorie
Chromatinbiologie

Histone

Biochem/physiol Actions

Die Immunogensequenz ist bei einem breiten Spektrum von Tier- und Pflanzenspezies identisch, weshalb eine weitreichende Kreuzreaktivität erwartet wird.

Erkennt Histon H3, Mr 17 kDa, an Ser10 phosphoryliert.

Packaging

25 Assays je Set. Empfohlene Verwendung: ~2 μg Antikörper je Chromatin-Immunpräzipitation (abhängig vom biologischen Kontext).

Physical form

Anti-Phospho-Histon-H3-Antikörper (Ser10) (monoklonales Maus-IgG, Klon CMA312). Ein Fläschchen mit 50 μg mittels Protein G aufgereinigtem Antikörper in 50 μl PBS mit 0,05 % Natrium. Bei -20 °C aufbewahren.

Normales Maus-IgG Zwei Fläschchen mit 25 μg aufgereinigtem Maus-IgG in 25 μl Lagerpuffer mit 0,1 % Natriumazid. Bei -20 °C aufbewahren.

Kontroll-Primer. Ein Fläschchen mit 75 μl von 5 μM jedes Primers, spezifisch für die Promotor-Region von humaner GAPDH. Bei -20 °C aufbewahren.
FÜR: TAC TAG CGG TTT TAC GGG CG
REV: TCG AAC AGG AGG AGC AGA GAG CGA

Preparation Note

Bei -20 °C ab Empfangsdatum 1 Jahr haltbar. Handhabungsempfehlungen: Das Fläschchen nach dem ersten Auftauen und vor dem Entfernen der Kappe zentrifugieren und die Lösung vorsichtig mischen. In Mikrozentrifugenröhrchen aliquotieren und bei -20 °C aufbewahren. Wiederholte Einfrier-/Auftauzyklen sind zu vermeiden, da sie das IgG beschädigen und die Produktleistung beeinträchtigen können.

Analysis Note

Chromatin-Immunpräzipitation:
Im Ultraschallbad behandeltes Chromatin aus mit Colcemid behandelten HeLa-Zellen (1 x 10⁶ Zelläquivalente je IP) wurde einer Chromatin-Immunpräzipitation mit entweder 2 µg normalem Maus-IgG oder Anti-Phospho-Histon-H3(Ser10)-Antikörper und dem Magna ChIP^® G (Katalognr. 17-611) unterzogen. Die erfolgreiche Immunpräzipitation von Phospho-Histon-H3(Ser10)-assoziierten DNA-Fragmenten wurde mittels qPCR unter Verwendung von Kontroll-Primern verifiziert (siehe Abbildungen).
Nähere Informationen zu den Experimenten entnehmen Sie bitte dem Protokoll für EZ-Magna ChIP G (Katalognr. 17-409) oder EZ-ChIP (Katalognr. 17-371).

Kontrolle
Enthält Maus-IgG-Antikörper als Negativkontrolle sowie für den humanen GAPDH-Promotor spezifische Kontroll-Primer.

Legal Information

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf unautorisierte kommerzielle Verwendung, zur In-vitro-Diagnostik, für Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.

Sicherheitshinweise

• Lagerklasse: 10 - Combustible liquids
• wgk: WGK 2