糊精分離膠^® 高性能產品的特性

這種堅固耐用的高解析度層析介質是以 34 µm Sepharose High Performance 矩陣為基礎。由於珠子的尺寸較小，MBP 標記蛋白會以狹窄的峰值洗脫，將進一步濃縮步驟的需求降至最低。純化是在生理條件下進行，使用麥芽糖進行溫和洗提可保留目標蛋白的活性。這些溫和的條件甚至可以純化完整的蛋白質複合物。

表 A3.1 概括了糊精 Sepharose High Performance 的主要特性。 Table A3.2 summarizes the characteristics of this chromatography medium in prepacked columns.

有關再生介質和色譜柱的詳細資訊如下。

表 A3.1.表 A3.1.糊精高效離相膠的特性

Matrix<	堅硬、高度交聯的 6% 瓊脂糖
平均粒徑	34微米
配體	糊精
動態結合容量1	約 7 mg MBP2*-parx.7 mg MBP2*-paramyosin-δ-Sal/ml 媒介 (Mr ~70 000, 多聚體在溶液中) 大約.16 mg MBP2*-β-galactosidase/ml medium (Mr ~158 000, multimer in solution)
Recommended flow velocity2	≤ 150 cm/h
最高流速2	< 300 cm/h<
最大背壓2	0.3 MPa, 3 bar
化學穩定性3	在所有常用的水性緩衝液、0.5 M NaOH（再生和清洗）
pH 穩定性，工作範圍 短期	> 7 2 至 13 2 至 13
儲存	2 °C 至 8 °C 於 20% 乙醇中

¹  結合能力取決於蛋白質。
²  H₂O在室溫下。
³  還原劑的存在，例如、5 mM DTT 可能會降低產率。較高的離子強度不會降低產率，因為 MBP 主要透過氫結合與糊精結合。不建議使用會干擾氫結合的物質，例如尿素和 Gua-HCl。10% 甘油的存在可能會降低產率，而 0.1% SDS 則可完全消除結合。

表 A3.2.MBPTrap HP 的特性

層析媒介	高效能纖維蛋白隔離膠
平均粒徑	34 µm
動態結合容量1	約.7 mg MBP2*-paramyosin δ-Sal/ml 媒介 (Mr ~70 000, 多聚體在溶液中) Approx.16 mg MBP2*-β galactosidase/ml medium (Mr ~158 000, multimer in solution)
色譜柱容量	1毫升或5毫升
色譜柱尺寸	0.7 × 2.5 cm (1 ml) 1.6 × 2.5 cm (5 ml)
建議流速	對於 1 ml 和 5 ml 色譜柱，流速分別為 1 和 5 ml/min
最大流速	1毫升和5毫升色譜柱分別為4毫升和20毫升/分鐘
最大背壓2	0.3 MPa, 3 bar
化學穩定性3	在所有常用的水性緩衝液中均穩定
pH 穩定性，工作範圍 短期	> 7 2 至 13
2 °C 至 8 °C 於 20% 乙醇中

¹ Binding capacity is protein dependent.
² H₂O at room temperature.
³ 還原劑（如 5 mM DTT）的存在可能會降低產率。較高的離子強度不會降低產率，因為 MBP 主要透過氫結合與糊精結合。不建議使用會干擾氫結合的物質，例如尿素和 Gua-HCl。10% 甘油的存在可能會降低產率，而 0.1% SDS 則可完全消除結合。

Dextrin Sepharose 產品的清洗

純化後，培養基應按以下方法再生：

1. 用 3 柱容量的蒸餾水再生色譜柱，然後再用 3 柱容量的 0.5 M NaOH 和 3 柱容量的蒸餾水再生色譜柱。對於大量糊精 Sepharose HP 媒介，使用 75 至 150 cm/h 的流速。
2. 在開始下一次純化之前，用 5 個柱容量的結合緩衝液（20 mM Tris-HCl、200 mM NaCl、1 mM EDTA，pH 7.4）重新校準色譜柱。

上述再生方法的另一種替代方法是用 0.1% SDS 取代 0.5 M NaOH。

如果使用P-1泵，在MBPTrap HP 1 ml色谱柱上最大流速为1-3 ml/min。

材料

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