Capto MMC

Capto MMC 是一種多模式陽離子交換器，具有弱陽離子交換器的特性。除了靜電互作用之外，配體結構還提供了其他互作用模式，例如疏水互作用、氫鍵和親硫互作用（圖 3.8）。不同的相互作用模式賦予介質新穎的選擇性，並使其具有耐鹽性，進而允許在無需稀釋或緩衝液交換步驟的情況下上載樣品，從而提高生產率。

圖 3.8. Capto MMC 配體。交互作用以箭頭表示：(A) 親硫基；(B) 疏水基；(C) 氫鍵；以及 (D) 靜電交互作用。

Capto MMC 以高剛性的瓊脂糖基質為基礎，允許大規模的高流速和低背壓，非常適合快速、高效和低成本的蛋白質純化。另請參閱 圖 3.1（多模式層析媒體）及其附帶的壓力-流量特性討論。

Capto MMC 可提高生產效率並降低成本：

• 即使在高電導率下也能達到高 DBC（蛋白質的結合可以在進料材料的電導率下進行）
• 高通量
• 新的選擇性
• 更小的單元操作（無需稀釋進料材料，這導致更小的槽和更快的操作）

高耐鹽性

Capto MMC 介質的上述各種相互作用提供了不同於傳統陽離子交換器的特性，包括在高鹽濃度下結合蛋白質（圖 3.9).因此，Capto MMC 可用於直接載入原料，而無需事先稀釋或交換緩衝液以降低起始原料的電導率。

圖 3.9. (A) Capto MMC 在 1 分鐘停留時間內對三種不同蛋白質在不同電導率下的 DBC。(B) Capto MMC 比傳統的陽離子交換器在起始材料的電導率方面有更大的操作範圍。

獨特的選擇性

在高電導率或低電導率的情況下，獨特的選擇性也可用於解決特定的純化問題。傳統陽離子交換器 (SP Sepharose Fast Flow) 與 Capto MMC 的比較顯示，兩種介質的選擇性有顯著差異 (圖 3.10)。在 SP Sepharose Fast Flow 上的洗脱曲线显示出一个峰，而在 Capto MMC 上的洗脱曲线显示出两个峰，可能是三个峰。原生凝膠電泳也顯示不同培養基的分離模式不同。

圖 3.10. 如上所述，使用人體血漿研究 (A) Capto MMC 和 (B) SP Sepharose Fast Flow 的選擇性。在原生 PhastGel™ 梯度 8%-25%上分析餾分 (箭頭標示) 和穿流池 (FT)，並進行 Coomassie™ 染色。高分子量標記（HMW，Cytiva）和未分離的血漿樣本也被應用到凝膠上。

與傳統的陽離子交換器不同，Capto MMC可能會結合高於目標蛋白pI的蛋白質（第2章中的圖2.5;多模式色譜中的結合/洗脱 vs 流過模式）。因此，如果使用 pH 值進行洗脫，Capto MMC 需要比傳統陽離子交換器更高的 pH 值。图 3.11所示的洗脱筛选研究说明了这一点。

该图比较了在 PreDictor 板中获得的结果和在色谱柱中获得的结果。在同時改變 pH 值和鹽濃度的情況下，洗滌步驟中獲得了最佳的回收率。

最佳回收率在 pH 6.75 時獲得，大約比 BSA 的 pI 高 2 個 pH 單位。詳情請參閱應用說明 28-9277-90，「使用 PreDictor 板在 Capto MMC 上進行洗脫條件的高通量篩選」

。

圖 3.11. BSA 在 (A) PreDictor 板和 (B) Tricorn 柱中的回收率（百分比）等高线图（见各等高线图内的标签）。對於 NH4Cl 和 NaCl 這兩種鹽類，在三種不同 pH 值下，將回收率繪製成鹽濃度 (y 軸) 和緩衝離子強度 (BIS; x 軸，從 0.05 到 0.30 M) 的函數。負載為 10%突破時 DBC 的 70%，負載緩衝液為 50 mM 醋酸鈉，pH 4.75，250 mM NaCl。實驗數據點以黑點表示。

鹽類型和添加劑

如前所述（第 2 章， 鹽類型和添加劑），鹽類型的選擇或添加劑的使用將影響多模式介質的色譜行為。例如，目標分子的回收率會受到所用鹽類的影響，如圖 3.11所示。不同添加劑對 Capto MMC 上 DBC 的影響如圖 3.12所示。在這個例子中，洗滌劑和消泡劑對容量沒有顯著的影響，而有機溶劑和氫鍵破壞劑則有較大的影響。

圖 3.12. 添加劑對 BSA 在 Capto MMC 上 DBC 的影響。DBC 繪製為在無添加劑情況下參照運行的百分比。BHT = 丁基羥基甲苯。

不同的添加劑也會影響結合能力和回收率。尿素和有機溶劑、乙醇和異丙醇對DBC的影響如圖3.12所示。Figure 3.12中顯示了尿素和有機改性劑對DBC的影響。尿素和有機改性劑存在時容量下降，表明可以使用這些改性劑來提高洗脱效率。

再生

有關培養基的維護，包括CIP和儲存，請參閱附錄2（培養基的維護和儲存條件）。

材料

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