近紅外線 (NIR) 螢光染料

Tracy 645 和 Tracy 652

在可見/近紅外 (NIR) 區域使用的長波長標記的紅色發光螢光染料在生命科學應用中非常有用，例如抗體和蛋白質標記。

Tracy652（表 1）是為了滿足對 NIR 螢光染料的需求而開發的專利染料。使用 Tracy 染料的優點如下：

• 在蛋白質標籤條件下（基本 pH 值，可防止染料分解或水解，以免導致標籤效率變差），能夠保持活化的 N- 羥基琥珀酰亞胺 (NHS) 酯的化學穩定性。
• 光穩定性。
• 以活化的 NHS 酯的形式溶於水性標籤介質中，減少了導致蛋白質標籤效率低下的沉澱現象。
• 可在典型的蛋白質標記方案中靈活使用。

本底螢光的減少是由於轉換到長波長激發時雷利和拉曼散射的大幅減少，以及樣品雜質在此區域自發螢光的減少。

表 1. Tracy 發光體的光譜資料，有助於共結物的染料/蛋白質比率計算。

Tracy 645 (free acid)					Tracy 652 (游離酸)
λ	λ (639 nm)		280nm		λex，最大 (648 nm)		280 nm
吸收 (PBS, pH 7)	0.343	1 µg/mL	0.495	50 µg/mL	0.373	1.818 µg/mL	0.455	50 µg/mL
0.029	0.044
∈	0.	222882	M-1cm-1	6437	M-1cmsup>-1cm-1	181253	M-1cm-1	8028	M-1cm-1
λem, max	658 nm (1 µg/mL, O.1M 磷酸緩衝液 pH7)				672 nm (1 µg/,mL, 0.1 M 磷酸緩衝液 pH7)

紅發光螢光染料相較於傳統短波長染料的幾大優點，使得 Tracy 染料在細胞和分子生物學或生物分析研究中具有極高的吸引力。^1-3

• 降低背景提高靈敏度。
• 在各種染料/蛋白質比率下，標記蛋白質的螢光信號強勁。
• 可使用低成本、可靠的雷射二極體作為激發源，取代壽命短、昂貴的氣體雷射。

Tracy 645在上述所有標準中都超越了傳統的螢光標籤，例如 Cy^® 5（圖 1）。其他更現代的相應類型的標籤在上述一個或多個標準中也有不足。

圖 1. Tracy 652 染料和 Cy® 5 的光稳定性。

用375 W白光燈照射白色Pyrex瓶中各1mM甲醇溶液，燈與探針距離20 cm，探針保持室溫，測量各染料的λ_ex,max 和λ_em,max 。

對 Tracy 染料的抗體結合物的最佳染料/蛋白質 (D/P) 比率的調查顯示，在 ~4:1 D/P 時發射強度最大。

使用 Tracy 染料的第二抗體結合物可用於熒光顯微鏡觀察的免疫染色應用（圖 2）。

圖 2. 大鼠胃切片免疫組織染色後的共焦顯微圖 (CLSM)（雙通道模式）。綠色通道：細胞角蛋白染色。一抗：兔抗細胞角蛋白；二抗：用 Atto 488 染料標記的抗兔 IgG（λex 488 nm）。紅色通道：肌動蛋白染色。一抗：來自小鼠的抗動蛋白；二抗：以 Tracy 645 染料標記的抗小鼠 IgG (λex 543 nm)。

此外，我們的目錄還提供可選擇性檢測固體表面（如凝膠或 Western 印跡）上 His 標記蛋白質的 NTA（nitrilo-triacetate）-Tracy 衍生物（圖 3）。

圖 3. His-tagged p38-MAPK 蛋白 (500 ng-25 ng) 在 4-20% Tris-Glycine SDS-PAGE 凝膠上分離。凝膠在 40% 的乙醇/10% 的乙酸中固定過夜，用水洗淨，並在黑暗中與 Ni-NTA-Tracy 652 (1:1000) 共孵育。凝膠洗淨後，使用 FLA-3000 Fuji® 雷射掃描器，搭配 633 奈米激發及 675 奈米發射濾光片進行成像。Ni-NTA-Tracy 652 (λex 652 nm, λem 677 nm) 在光譜的紅色區域被激發。

Tracy 652 已應用於雙色多重免疫印跡法中：在 4-20% Tris-Glycine SDS-PAGE 凝膠上分離 5 到 500 ng 的蛋白質 1 和蛋白質 2，然後轉移到低螢光 PVDF 膜上。膜用 PBS 中的 5% BSA 阻斷，分別與蛋白質 1 和蛋白質 2 的抗體孵育，並用結合了螢光染料 Atto 550（綠色）和 Tracy 652（紅色）的相應二抗探測（圖 4）。

圖 4. 使用兩種一抗和兩種抗 IgG 染料結合物進行蛋白 1 和蛋白 2 的免疫印跡檢測。使用 FLA-3000 Fuij® 雷射掃描器依序成像。Atto 550 的第一張圖像：λex 532 nm，搭配 580 nm 發光濾鏡。Tracy 652 的第二張圖像：λex 633 nm，搭配 675 nm 發光濾鏡。

材料

抱歉，發生意外錯誤。

Network error: Failed to fetch