MISSION的研發團隊與RNAi Consortium (TRC)的科學家合作，產生了一系列的載體，讓您的RNAi實驗得以順利進行。基本載體 pLKO.1-puro 是由 Broad Institute 所開發1 ，是 TRC 的一部分。我們對 TRC 的貢獻是一系列用於關鍵控制實驗的載體，以及用於定制 shRNA 生產的載體。
TRC1.5 Vector: pLKO.1-puro
TRC1.5 控制向量
TRC1.5替代向量骨架
TRC2 Vector：TRC2-pLKO-puro
可誘導型 shRNA 載體
慢病毒包裝載體
References
TRC1.5 矢量：pLKO.1-puro载体和使用
TRC1.5克隆与TRC1克隆的载体骨架完全相同
pLKO.1-1 使用嘌呤霉素选择性标记选择稳定的基因沉默，同时通过与兼容的包装质粒共转染，可以在包装细胞（HEK293T）中产生自失活复制无能的病毒颗粒。2,3 TRC1.5是我們獨有的產品組合，包含近200,000個克隆，其中包括49,000多個經過驗證的克隆。它結合了 TRC1 的所有內容，加上針對 2,661 個新人類基因和 2,395 個小鼠基因的額外 39,212 個克隆。不同於腺病毒或以小鼠為基礎的 MMLV 或 MSCV 逆轉錄病毒系統，以慢病毒為基礎的顆粒允許特定 shRNA 建構物能有效感染並整合到已分化和非分裂的細胞中，例如神經元和樹突細胞，克服了使用這些細胞系時轉染率低和整合困難的問題。相較於 siRNA 及其他以向量為基礎的系統，pLKO.1-puro 提供了長期基因敲除與表型觀察、轉導難以或敏感細胞株（非分裂細胞或原代細胞）的解決方案，並且是一種經濟的可再生資源。
有 shRNA 插入時，pLKO.1-puro 質粒的長度為 7,086 bp，如以下向量圖所示。如果沒有 shRNA 插入，pLKO.1-puro 向量的長度為 7,052 bp。所提供的序列檔是空的 pLKO.1-puro 向量（7,052 bp）。
TRC1.5向量描述與功能
TRC1.5 替代載體骨架
我們提供多種替代載體骨架，作為我們標準 shRNA 產品的一部分。透過我們可客製化的 MISSION shRNA 訂購介面，您可以直接在質粒 DNA 或慢病毒轉導粒子的克隆詳細頁面上，線上訂購這些載體骨架中的 TRC shRNA。如需訂製髮梢，請造訪我們的 訂製克隆 頁面了解訂購細節。
我們也提供多種含有螢光蛋白或 UbC 促機的替代載體骨架。這些建構物僅作為客製選項提供。請訪問我們的 定制克隆 頁面了解訂購詳情。
TRC2載體：TRC2-pLKO-puro 向量和使用
TRC2-pLKO-puro 向量也允許 shRNA 的瞬間或穩定轉染，以及慢病毒粒子的生產。TRC1.5載體與TRC2載體之間的唯一變化是加入了WPRE（或稱木鱉肝炎轉錄後調節元件）。4 這樣就可以增強慢病毒傳遞的轉基因的表達。5 和 TRC1.5 一樣，穩定的基因沉默是通過使用嘌呤霉素選擇性標記來實現的。透過與相容的包裝質粒共轉染，可在包裝細胞 (HEK293T) 中產生自我失活的複製無效病毒粒子。TRC2-pLKO-puro 為長期穩定的基因敲除和表型觀察、難於轉導或敏感的細胞株（非分裂細胞或原代細胞）以及增強轉基因的表達提供了解決方案。如果沒有 shRNA 插入，TRC2-pLKO-puro 向量的長度為 7,484 bp。
TRC2-pLKO-puro 序列（無 shRNA 插入）
TRC2 向量圖（TRC2-pLKO-puro）
TRC2 向量圖（TRC2-pLKO-puro）
請注意：目前 TRC2 還沒有替代的載體骨架。
可誘導型 shRNA 向量
pLKO 向量已被重新設計，包含 LacI（抑制器）和經改良的人類 U6 shRNA啟動子與 LacO（運算子）序列。在沒有乳糖類似物 IPTG（異丙基-β-D-硫代半乳糖苷）的情況下，LacI 會與 LacO 結合，阻止 shRNA 的表達。當 IPTG 存在時，異構 LacI 抑制因子會改變構象，從 lacO 修改過的人類 U6 促進子中釋放出來，進而允許 shRNA 表達。
我們很榮幸為您的研究提供兩種不同的 IPTG 誘導型載體。pLKO-puro-IPTG-3xLacO，包含三個lac操作子序列（兩個在U6啟動子中，一個在啟動子的3'），提供了嚴格的調控和巨大的基因沉默。pLKO-puro-IPTG-1xLacO 載體在 U6啟動子中含有單一的lac操作子序列，這使得shRNA的表達具有優勢，但在不誘導時對啟動子的控制較鬆。
參考資料
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