一般 shRNA 常見問題

什麼是shRNA？

shRNA是慢病毒建構體LTR區域內的短髮夾序列。當 LTR 至 LTR 區域整合到宿主基因組時，shRNA 由細胞產生，並穿梭到細胞質中，在細胞質中被複合酶 Dicer 裂解。裂解完成後，此雙鏈分子的一條鏈會被載入 RISC（RNA Induced Silencing Complex，RNA 誘導消滅複合物），在那裡尋找互補的 mRNA 目標進行降解。

您能保證使用您的複製體將其擊倒嗎？

We guarantee ；當您購買 shRNA 詳細頁面上針對您感興趣的基因所定義的克隆集數量 (此數量會有所不同，但通常為 5 個克隆)，其中至少有一個基因的克隆會產生超過 70% 的基因敲除率。

有哪些基因家族集？

目前提供細菌甘油庫存格式
目前提供慢病毒轉導粒子格式
我們持續更新我們的基因面板產品。它們以甘油或慢病毒格式提供。在未來幾個月內，我們將陸續提供更多的基因組。如果您感興趣的基因組尚未上市，請向我們洽詢進階客製化製備事宜。我們可以隨時組合客製化基因組。

為什麼總是有 3' UTR 區域的克隆？

包含了對抗目標3'UTR的克隆，因此可以通過引入與目標相對應的cDNA克隆來挽救基因敲除表型。與內源拷貝相比，來自外源 cDNA 克隆的轉錄物不易被沉默。許多刊物/審查委員會都需要這樣的實驗來驗證觀察到的表型。然而，雖然大多數目標集都有此附加功能，但並非所有的目標集都有 3' UTR 克隆。

我可以在 TRC "Search for shRNA hairpin sequences page「 上搜尋並設計自己的 shRNA 嗎？

用於設計 MISSION^® TRC 克隆庫的演算法與 TRC 頁面上的大致相同。然而，在 Broad-TRC 克隆庫的過程中，對設計進行了許多改進。您在公開 TRC 頁面上找到的克隆庫並不是最新的設計版本。更新後的目標集僅提供給 TRC 會員或透過向我們購買。

您的 MISSION^® TRC shRNA 克隆後會進行測序，但由於逆轉錄病毒載體中會發生高頻率的重組，它們是否會在每一輪擴增後進行例行測序？

我們會在複製後隨機對克隆進行序列驗證。我們會對最後一次複製的約 5% 克隆進行序列驗證。我們的 R&D 小組沒有看到任何重組的證據。TRC 文庫已被克隆到為了避免這些問題而優化的骨架中。

我想在您目錄中提供的三種 RNAi--細菌庫存、質粒 DNA 和慢病毒粒子之間做決定，以便進行研究專案。對於質粒 DNA，有沒有辦法使用 PCR 或其他方法來繁殖我們得到的菌種？另外，是否有任何研究論文或文獻鏈接可以讓我查看已被沉默的基因的數據？

MISSION^® TRC shRNA 文庫由三種格式組成，為您提供靈活性和便利性。純化的質粒 DNA 格式可直接用於瞬間轉染實驗，或與我們的慢病毒包裝混合物（產品編號： SHP001）一起使用以製造慢病毒粒子。

您可以將質粒轉換到合格細胞（我們建議使用 GC5 細胞）來製造細菌甘油庫存，以進一步繁殖 DNA。它們可以直接加入細胞中進行穩定的轉導。您說得對，轉導的細胞會持續表達整合的 shRNA。這些細胞可以擴展到許多下游檢測中。

shRNA 克隆可以用什麼格式訂購？

我們提供多種 shRNA 克隆，通常約有五種，適用於人類和小鼠基因組。我們的生物資訊學團隊可以幫助您解決這個問題。每個目標克隆有三種格式可供選擇：細菌甘油庫存、純化質粒 DNA 和慢病毒粒子。有關訂購 MISSION^® 產品的詳細資訊，請 點選此處。

轉染 shRNA 質粒是否有特殊的規程？

不，您可以使用您目前轉染質粒 DNA 的方法。如果您目前沒有轉染質粒 DNA，我們推薦您使用 ESCORT^™ V 轉染試劑。

我們的 protocols(協議)頁面上有其他協議

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什麼是 TRC 編號？

由 The RNAi Consortium 開發的唯一號碼，用以識別 TRC 圖書館。TRC 編號以 "TRCN" 開頭，後跟 10 位數。(例如：MISSION^® shRNA TRCN0000030720）。

使用本產品需要授權嗎？

如果您向我們購買 MISSION^® TRC 產品用於研究用途，我們將向您提供 Oxford BioMedica 專利和 Benitec 專利的標籤授權。但是，如果您從其他來源取得慢病毒 shRNA 向量，您將需要購買這些專利的授權。我們所提供的授權僅供研究使用。請諮詢您自己的法律部門，以取得有關自由操作的意見。

商業應用程式是否需要另外購買授權？

是的。對於商業用途，您需要聯絡 OxfordBioMedica 和 Benitec 以取得不同的授權。

甘油、DNA 或病毒庫存可以冷凍/解凍多少次？

雖然我們強烈建議避免過度冷凍解凍，但 DNA 和甘油庫存仍可容納多次冷凍/解凍。儘管如此，多次冷凍/解凍慢病毒庫存會嚴重影響病毒的功能。我們建議在第一次解凍後進行等分，以便在未來的實驗中最大限度地提高病毒的存活率。

您的shRNA 是否有相匹配的細胞生物/PCR 產品？

我們提供經過驗證的高品質抗體，用於蛋白質檢測。此外，我們還提供一系列 PCR 相關產品。

有哪些載具可用來傳遞 shRNAs?

非病毒傳輸：裸體、聚合物和脂質傳輸試劑 病毒傳輸：慢病毒、逆轉病毒和腺病毒。

shRNA驗證何時完成？

我們與 Broad 合作，每月驗證數以千計的 shRNA，並在我們的網站上提供這些資料供您評估。

shRNA 是如何驗證的？

SYBR Green qPCR 用於確定特定 shRNA 的相對沉默效果。

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