組織樣本中的蛋白酶 K

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• 蛋白酶 K 在組織樣本中分離核酸的作用是什麼？
• 如何使用蛋白酶 K 從組織樣本中分離核酸？
• 如何用蛋白酶 K 從 Ffpe 組織樣本中分離核酸？
• 如何大量訂購蛋白酶 K？如何訂購大量蛋白酶 K
• 參考文獻

蛋白酶 K 在分離組織樣本中的核酸時有什麼作用？

福爾馬林固定、石蠟包埋 (FFPE) 的肝臟組織經紅蘇木精和伊紅 (H&E) 染色

蛋白酶 K 是一種廣譜絲氨酸蛋白酶，常用於從組織樣本中分離核酸。它的作用是消化組織樣本中的蛋白質，這些蛋白質會干擾核酸的分離和純化。 

組織樣本通常含有各種蛋白質，包括組織蛋白、核酸酶和其他酵素，這些蛋白質會降解 DNA 和 RNA，並干擾 PCR 和測序等下游應用。

蛋白酶 K 可以分解這些蛋白質，將核酸從組織基質中釋放出來，並減少它們被內源酵素降解的情況。

蛋白酶 K 可以在各種條件下有效地消化蛋白質，包括高溫、高鹽濃度和有去垢劑的情況下。

使用蛋白酶 K 消化後，核酸可以使用各種方法進一步純化，例如酚-氯仿萃取、柱式純化或磁珠式純化。純化後的核酸可用於下游應用，例如 PCR、測序或雜交分析。

如何用蛋白酶 K 從組織樣本中分離核酸？

從組織樣本中分離核酸通常涉及幾個步驟，包括組織均質化、用蛋白酶 K 消解蛋白質以及純化核酸。以下是程序的一般概述： 

1. 組織均質化：首先將組織樣本均質化，以破壞組織基質並釋放核酸。

2.蛋白消化：蛋白酶 K 被添加到均質化的組織樣本中，以消化蛋白質並釋放核酸。所需的蛋白酶 K 量會因組織類型和使用的組織量而異。一般而言，每毫升組織勻質液會使用 100-200 μg 的蛋白酶 K。消化可在 37-65 °C 下進行，時間從 30 分鐘到數小時不等，視組織類型和所需蛋白質消化程度而定。

3.蛋白酶 K 的失活：蛋白質消化後，蛋白酶 K 通常會在 95-100 °C 下加熱樣品 10-15 分鐘，使其失活。這有助於確保蛋白酶 K 完全失活，不會干擾下游應用。

4.核酸純化：然後從蛋白酶 K 處理過的樣品中純化核酸。這可以用多種方法完成，包括酚-氯仿提取、柱式純化或磁珠式純化。純化方法的選擇取決於所需核酸的類型和數量、下游應用以及可用設備等因素。

純化後，可使用分光光度計或螢光儀對核酸進行定量，並使用凝膠電泳或其他方法評估其品質。純化後的核酸可用於下游應用，例如 PCR、測序或雜交分析。

蛋白酶 K 能降解與 DNA 結合的交聯蛋白，有助於從 FFPE 組織樣本中純化 DNA。

如何用蛋白酶 K 從 FFPE 組織樣本中分離核酸？

由於福爾馬林固定過程會造成蛋白質和核酸的交聯，因此從福爾馬林固定的石蠟包埋（FFPE）組織樣本中分離核酸可能會是一項挑戰。然而，蛋白酶 K 可用於消化蛋白交聯，並釋放出組織中的核酸。以下是使用蛋白酶 K 從 FFPE 組織樣本中分離核酸的一般程序概述：

1. 去石蠟：首先對 FFPE 組織樣品進行脫石蠟處理，以去除石蠟，使組織暴露，以便進行後續步驟。這可以使用二甲苯或其他有機溶劑完成。

2.重新水化：

3. 蛋白質消化：蛋白酶 K 被添加到重新水化的組織中，以消化蛋白質並釋放核酸。所需的蛋白酶 K 量會因組織類型和使用的組織量而異。一般而言，每毫升組織勻質液會使用 100-200 μg 的蛋白酶 K。

4.蛋白酶 K 的失活：蛋白消化後，蛋白酶 K 通常會在 95-100 °C 下加熱 10-15 分鐘來失活。這有助於確保蛋白酶 K 完全失活，不會干擾下游應用。

5.核酸純化：然後從蛋白酶 K 處理過的樣品中純化核酸。這可以用多種方法完成，包括酚-氯仿提取、柱式純化或磁珠式純化。純化方法的選擇取決於所需核酸的類型和數量、下游應用以及可用設備等因素。

純化後，可使用分光光度計或螢光儀對核酸進行定量，並使用凝膠電泳或其他方法評估其品質。然後，純化的核酸可以用於下游應用，例如 PCR、測序或雜交分析。

此方案有多種變異，具體細節可能因所分離的核酸類型和下游應用而異。然而，使用蛋白酶 K 消化是從 FFPE 組織樣本中分離核酸的許多方案中的常見步驟。

如何在血液 DNA 提取中使用蛋白酶 K。 如何在不同程序中使用蛋白酶 K。

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