蛋白酶 K 如何用於血液 DNA 萃取應用
部分概述
血液樣本中的 DNA 雙螺旋鏈
蛋白酶K在血液DNA提取中的作用是什麼？
蛋白酶K（Pro K）是DNA提取方案中常用的一種酶，可降解可能干擾下游應用（如PCR、qPCR或測序）的蛋白質。
蛋白酶 K 對於去除核內與 DNA 緊密結合的組蛋白特別有用。
在血液DNA提取中，蛋白酶K可以幫助破壞細胞膜和核膜，從細胞中釋放DNA。
此外，它還可以消化樣本中存在的各種蛋白質，包括會降解DNA的核酸酶。
在血液DNA提取中使用蛋白酶K可以提高DNA的產率和純度，使其更適合各種分子生物學技術的應用。
蛋白酶K是一種高純度的蛋白酶，它可以消化樣本中存在的各種蛋白質，包括會降解DNA的核酸酶。
血液是一種複雜的生物樣本，包含各種成分，包括紅血球、白血球、血小板、血漿和 DNA。從血液中分離 DNA 通常需要幾個步驟，包括：
1. 裂解紅血球 (RBC)：紅血球含有高濃度的血紅素，會干擾下游應用。因此，血液 DNA 萃取的第一步是裂解 RBC，釋放含有 DNA 的有核白血球 (WBC)。
2. WBC 的分離：
3. 消化蛋白質：白細胞中含有高濃度的蛋白質，這些蛋白質會抑制下游應用。為了去除這些蛋白質，需要執行蛋白酶 K 消解步驟，分解蛋白質並釋放 DNA。
4. DNA 提取：蛋白質消化後，使用多種方法從樣本中提取 DNA，例如酚-氯仿提取、矽膠結合或磁珠純化。
5. DNA 定量：最後，使用分光光度法或其他方法對提取的 DNA 進行定量，以確定其濃度和純度。
使用蛋白酶 K 從血液中提取 DNA 的方案
以下是可以用來從血液中分離 DNA 的方案：
1. 取 2 mL 血液樣本，加入 10 至 20 μL TE 緩衝液，混勻。
2. 以 2,500 rpm 離心 20 分鐘
3.
3. 棄去上清液，加入 10 至 15 μL TE 緩衝液輕鬆混勻。
4. 棄去上清液，加入 10 至 15 μL TE 緩衝液輕鬆混勻。
5. 在 56 ℃ 至 60 ℃ 下孵育樣品 1 至 2 小時或直到顆粒正常溶解。
6. 現在向 Falcon 管中加入 1 至 2 mL 冷異丙醇和少量 NaCl，倒轉試管一段時間以獲得沉澱物。
7. 以 8,000 至 10,000 rpm 的轉速離心，使沉澱物沉澱在管底。
8. 以 8,000 至 10,000 rpm 的轉速離心，使沉澱物沉澱在管底。 棄去上清液，加入 1 mL 乙醇，以 10,000 rpm 離心 1 至 2 分鐘.
9. 棄掉乙醇，在乾燥機中乾燥膠粒.
10.在膠粒中加入 TE 緩衝液（pH 8.0），放入 37 ℃水浴中 2-3 小時
11.
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參考資料
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