如何在不同程序中使用蛋白酶 K 的指南

如何溶解蛋白酶 K 粉末？

蛋白酶 K（Pro K，ProK）是分子生物學中常用的蛋白酶，通常用於 DNA 或 RNA 提取或蛋白質消化。要製備蛋白酶 K 的儲備溶液，請遵循以下步驟：

1.  使用天平稱出所需數量的蛋白酶 K 粉末。用量取決於具體的方案，但常用的濃度範圍在 10 到 100 mg/mL 之間。

2.  將蛋白酶 K 粉末加入試管或容器中。

3.  將適量的緩衝液或水加入試管或容器中。所使用的特定緩衝液或溶劑取決於所遵循的應用和協議。常用的緩衝液包括 Tris-HCl、乙二胺四乙酸 (EDTA) 或 TE 緩衝液。

4.   攪拌管或容器中的內容物，上下攪拌或移液攪拌均勻。

5.  在特定方案所建議的溫度和時間下孵育試管或容器。

6.  孵育後，蛋白酶 K 溶液即可用於下游應用。

注意：蛋白酶 K 應儲存在 -20 °C 或以下以保持其穩定性和活性。重要的是，要保護蛋白酶 K 免於暴露於熱量、濕氣和其他污染物中，以確保其最佳性能。

蛋白酶 K 能溶解於水嗎？

蛋白酶 K（Pro K，Prok）能溶解於水，但所使用的特定溶劑將取決於所遵循的應用和協議。蛋白酶 K 是一種蛋白酶，某些溶劑或條件可能會使其變性或失活，因此必須遵循製造商的說明，或所使用的特定方案，以確保最佳的活性。

雖然蛋白酶 K 通常溶解在水或緩衝溶液（如 Tris-HCl 或 TE 緩衝液）中，但必須注意的是，所使用的特定緩衝液或溶劑可能會影響酶的穩定性。例如，蛋白酶 K 會因十二烷基硫酸鈉 (SDS) 等高濃度去垢劑而失活，因此不應將其溶解在含有高濃度這些試劑的溶液中。

在將蛋白酶 K 溶解於水或任何其他溶劑之前，請務必查看特定的方案和製造商的說明，以確保使用正確的溶劑和條件來達到預期的應用目的。

蛋白酶 K 的最佳 pH 值是多少？

蛋白酶 K 活性的最佳 pH 值約為 8.0 到 9.0。蛋白酶 K 是一種絲氨酸蛋白酶，對於裂解蛋白質中的肽鍵具有廣泛的特異性。這種酵素在很寬的 pH 值範圍內都有活性，在 pH 值 4.0 到 12.0 之間可以觀察到一些活性，但最高的活性通常是在中性到微鹼性的 pH 值上觀察到的。

必須注意的是，具體的 pH 要求可能因應用和使用的方案而異。例如，某些方案可能需要特定的 pH 範圍，以獲得特定底物或樣品的最佳裂解或消化效果。此外，溫度、鹽濃度和反應中的其他試劑等因素也可能影響蛋白酶 K 活性的最佳 pH 值。

蛋白酶 K 在室溫下有效嗎？

蛋白酶 K 在包括室溫在內的廣泛溫度下都具有活性，但蛋白酶 K 活性的最佳溫度約為 37 °C。

在某些情况下，实验方案可能会结合使用孵育时间和温度来优化蛋白酶 K 在特定应用中的活性。

總的來說，雖然蛋白酶 K 在室溫下也有活性，但大多數應用的最佳溫度是 37 °C。

蛋白酶 K 的孵育時間是多久？

蛋白酶 K 的孵育時間會因特定方案和應用而異。

例如，在 DNA 提取方案中，蛋白酶 K 通常用于消化细胞蛋白和其他杂质，以从细胞中释放 DNA。

一般而言，蛋白酶 K 的孵育時間取決於消化效率的最佳化，以及目標樣品或分子的過度消化或降解風險的最小化。

此外，需要注意的是，蛋白酶 K 的孵育時間還會受到其他因素的影響，例如溫度、pH 值、鹽濃度以及其他試劑或抑制劑的存在。重要的是，要針對所使用的特定方案優化孵育條件，以確保最佳的活性和性能。

什麼會抑制蛋白酶 K？

蛋白酶 K 會受到各種因素的抑制，包括變性劑、去垢劑和蛋白酶抑制劑。蛋白酶 K 對抑制的敏感性取決於特定的應用和使用的方案。

蛋白酶 K 的一些常見抑制劑包括：

1.

2.   EDTA：EDTA 是一種螯合劑，可以與蛋白酶 K 活性所必需的金屬離子結合。

3.   尿素：高濃度的尿素可以使蛋白酶 K 變性和失活。

4.   清潔劑：一些去垢劑（如 Triton X-100 或 Tween^® 20）會抑制蛋白酶 K 的活性，尤其是在高濃度時。

5.   蛋白酶抑制劑：一些蛋白酶抑制劑（如苯甲基磺酰氟 (PMSF)）可以不可逆地抑制蛋白酶 K 的活性。

需要注意的是，蛋白酶 K 對抑制作用的敏感性可能取決於特定的應用和使用的方案。例如，在某些 DNA 提取方案中，混沌鹽或去垢劑的存在可以增強蛋白酶 K 的活性，而在其他方案中，這些相同的試劑可能會抑制該酶。

使用蛋白酶 K 時，重要的是要遵循特定的方案和製造商的說明，以優化酶的活性並將抑制的風險降至最低。

如果使用太多蛋白酶 K 會怎樣？

使用太多蛋白酶 K 可能會導致目標樣本或分子過度消化，從而導致降解或失去活性。特定應用的最佳蛋白酶 K 用量可能取決於樣本類型、數量和其他因素。

例如，在 DNA 提取方案中，使用過多的蛋白酶 K 可能會導致細胞成分和其他污染物被過度消化，從而導致 DNA 降解和產量降低。過度消化也可能造成不需要的抑制劑釋放，例如血紅素或腐植酸，這些抑制劑會干擾下游應用。

過度消化也可能導致目標分子或結構被消化。例如，在蛋白質消化方案中，使用過多的蛋白酶 K 可能會導致相關蛋白質降解，降低其產率或活性。

蛋白酶 K 的最佳用量可能因樣品的類型、數量和其他因素而異。建議使用滴定曲線來決定特定應用中蛋白酶 K 的最佳用量，而不是使用可能導致過度消化或降解的固定用量。

顯示滴定劑加入量如何增加分析溶液 pH 值的 Sigmoidal 圖表

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參考資料

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