MISSION^® 慢病毒控制項

進行 shRNA 實驗時，適當的對照是實驗設計的關鍵要素。適當使用對照允許準確解釋基因敲除結果，並確保觀察到的表型具有特異性。我們提供各種陽性、陰性和轉導對照品，以滿足這些需求。所有的對照品都有純化質粒 DNA 和慢病毒粒子兩種形式。DNA 格式的對照品可用於直接轉染實驗，或與 MISSION^® Lentiviral Packaging Mix (SHP001)結合使用，以製造複製無效的病毒粒子，用於轉導實驗。此外，我們最受歡迎的對照品現在也以高滴度的形式提供"現成的！"這些對照品以慢病毒形式提供，最低滴度為 10⁹ TU/ml（p24 分析）。所有其他對照以及任何 MISSION^® TRC shRNA 都可以透過我們的定制慢病毒生產流程製備成高滴度格式。

MISSION^®  研發團隊與 the RNAi Consortium (TRC) scientists, have generated a series of controls to enable successful implementation of your shRNA experiments.TRC1.5-pLKO.1-puro¹ 基礎載體是由 Broad Institute 開發，是 TRC 的一部分。TRC1.5 為本公司專有，包含近 200,000 個克隆，其中包括 49,000 多個經過驗證的克隆。它結合了 TRC1 的所有內容，加上針對 2,661 個新人類基因和 2,395 個小鼠基因的額外 39,212 個克隆。TRC1.5 克隆與 TRC1 克隆的載體骨架完全相同。

我們是 TRC1.5 和 TRC2 的合作成員和供應商。TRC2 的載體略有不同。TRC1.5載體和TRC2載體之間唯一的變化是增加了WPRE（或稱木鱉肝炎轉錄後調節元件）。² 因為有兩種載體骨架，我們也提供了兩套對照，以獲得最佳的實驗結果。

對於大多數的 RNAi 需求而言，成長性表達的 shRNA 是有用的，但進一步的特性分析往往需要調控基因表達的能力。在研究必需基因和致死基因時，調節表達尤其重要。我們很榮幸能提供 IPTG-inducible shRNA vectors as the latest development from our continued partnership in TRC.

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MISSION TRC1.5 shRNA 控制
TRC1.5 控制描述 
     TRC1.5 陰性對照
     TRC1.5 Positive Controls for Transduction/Transfection
     TRC1.5 陽性對照 用於敲除

MISSION TRC2 shRNA 對照
TRC2對照說明 
      轉導/轉染用TRC2陽性對照
 .nbsp;    TRC2基因敲除陽性對照

誘導型控制描述
     可誘導性陰性對照

Mission^® shRNA Controls

TRC1.5 控制描述

注意：所有控制的向量圖可以在 TRC1.5 陰性對照

未處理的細胞
對於任何好的實驗，陰性對照的第一個建議是未處理的細胞。未處理的細胞將提供比較所有其他樣品的參考點。

Empty Vector Control (SHC001, SHC001V, SHC001H)
空載體 TRC1.5-pLKO.1-puro，是一個有用的陰性對照，它不會激活 RNAi 通路，因為它不包含 shRNA 插入。它可以觀察轉染過程或慢病毒載體傳遞對細胞的影響。以空載體轉染的細胞可提供有用的參考點，以比較特定的基因敲除。

Non-Targeting shRNA Controls (SHC002, SHC002V, SHC002H, SHC016, SHC016V, SHC016H)
這些非靶向 shRNA 向量是有用的陰性控制，將激活 RISC 和 RNAi 通路，但不針對任何人類或小鼠基因。  非哺乳動物非靶向控制已被發現可以靶向 tGFP 的一部分。如果您正在使用 tGFP 表達的細胞系進行實驗，您應該考慮購買我們最新的非靶點 shRNA 對照組，它已經經過生物資訊學的判定，不會針對任何物種的任何基因。這樣可以檢驗 shRNA 轉導和 RNAi 啟動對基因表達的影響。以非靶點 shRNA 媒體轉染的細胞也可提供有用的參考，以解釋基因敲除的情況。

TurboGFP shRNA (SHC004, SHC004V, SHC004H), eGFP shRNA (SHC005,&bnbsp;SHC005V), ；and Luciferase shRNA (SHC007),SHC007V)
由於這些 shRNA 不針對任何已知的人類或小鼠基因，因此它們可以在許多 shRNA 實驗中作為非靶向對照。

TRC1.5 Positive Controls for Transduction/Transfection

我們現在為 TRC1.5-pLKO.1-puro 骨架提供多種帶有螢光報告的對照。此外，我們還提供了兩種帶有替代啟動子驅動螢光報告的螢光報告對照，即泛素 C (UbC)。下表和下圖顯示了我們的螢光蛋白對照組所用的螢光蛋白的激發和發射波長。

螢光蛋白的激發和發射波長

Catalog Number	發光體	Fluorophore	激發 (nm)	發射 (nm)
SHC003 / SHC014	TurboGFP	482	502
SHC012	555	584

TurboGFP 控制向量 (SHC003, SHC003V, SHC003H)
此載體是測量轉染效率和優化 shRNA 傳遞的有用對照。TurboGFP™ 控制載體由慢病毒骨架載體 pLKO.1-puro 組成，含有由 CMV 促動子驅動的 TurboGFP 編碼基因。轉染此載體可快速目視確認轉染和傳輸是否成功。

細胞在轉導後 48 小時表達 TurboGFP。使用基於 p24 的 ELISA 估計慢病毒滴度為 1.0 x 10⁶ TU/ml。

TagRFP 控制向量(SHC012, SHC012V)
這是測量轉導效率和優化 shRNA 傳遞的有用對照。TagRFP™ 控制載體包括慢病毒骨架載體 pLKO.1-puro，含有由 CMV 促動子驅動的 TagRFP 編碼基因。此控制提供成功轉導的視覺確認。

誘導後 6 天以 MOI 5 表達 TagRFP 的細胞。

UbC-TurboGFP Control Vector (SHC014, SHC014V)SHC014V" href="/TW/zh/product/SIGMA/SHC014V">SHC014V)
這是測量轉導效率和優化 shRNA 傳遞的有用對照。TurboGFP™ 控制載體由慢病毒骨架載體 pLKO.1-puro 組成，包含由 UbC 促動子驅動的 TurboGFP 編碼基因。此控制提供成功轉導的視覺確認。

誘導後 6 天以 MOI 5 表達 UbC-TurboGFP 的細胞。

TRC1.5 用於敲除的陽性對照

TurboGFP shRNA (SHC004, SHC004V, SHC004H)
TurboGFP shRNA 載體由 TRC1.5-pLKO.1-puro载体，含有靶向TurboGFP的shRNA，可作为阳性对照快速观察基因敲除。實驗證明，此 TurboGFP shRNA 對照物在 HEK293T 細胞中 24 小時後可減少 99.6% 的 GFP 表達。

eGFP shRNA(SHC005, SHC005V)
eGFP shRNA载体由TRC1.5-pLKO.1-puro载体，含有靶向eGFP的shRNA（GenBank Accession No.

eGFP shRNA 在 HEK293T 細胞中的抑制效率。圖片顯示轉染後 48 小時。 A) 單獨 100 ng eGFP 表達質粒。 B) 100 ng eGFP 質粒 + 200 ng MISSION eGFP shRNA Control Vector. C) 明視場照明。

Luciferase shRNA (SHC007, SHC007V)
MISSION Luciferase shRNA 載體由 TRC1.5-pLKO.1-puro载体，含有针对北美萤火虫荧光素酶的shRNA插入。此對照可用作陽性對照，以快速確認基因敲除。

人類陽性對照 #1，B2M shRNA
B2M 是一種廣泛表達的基因，這種蛋白存在於大多數細胞的表面。此對照將提供清楚且可測量的人類基因目標敲除，通常在 A549 細胞（一種人類上皮肺癌細胞株）中可達到 80-90% 的敲除率。在我們的實驗中，我們使用的 MOI 為 3，細胞在轉化後 1 天置於嘌呤霉素選擇下，並生長 1-2 週。使用 B2M 特異性引物探針組進行 RNA 分析。Western blot 資料也顯示此對照物會造成基因敲除。

Human Positive Control #2, ARHGDIA shRNA
此對照將提供清楚且可測量的人類基因目標敲除，在 A549 細胞（一種人類上皮肺癌細胞株）中通常為 80-90%。Rho GDP Dissociation Inhibitor (GDI) alpha (ARHGDIA) 是一種廣泛表達的基因，在大多數細胞中都能找到這種蛋白質。

A549 cells were transduced with either the empty vector control, SHC001V.  然後被製備成細胞裂解液。通過超支鏈 PCR 確定 mRNA 水平已被清除後，使用抗 ARGHDIA 抗体進行 Western Blot 探測蛋白水平， R3025.觀察到蛋白質幾乎完全消失。

TRC2 shRNA 控制項

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TRC2 控制描述

注意：所有對照的向量圖可以在 shRNA 向量映射頁面。

TRC2 陰性對照

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未處理的細胞
任何好的實驗，陰性對照的第一個建議是未處理的細胞。未處理的細胞將提供比較所有其他樣本的參考點。

空載體對照(SHC201, SHC201V)
空載體 TRC2-pLKO-puro 是一個有用的陰性對照，它不會啟動 RNAi 通路，因為它不包含 shRNA 插入。它可以觀察轉染過程或慢病毒載體傳遞對細胞的影響。使用空載體轉染的細胞可提供有用的參考點，以比較特定的基因敲除。

非靶向 shRNA 對照 (SHC202, SHC202V, SHC216, SHC216V)
這些非靶向 shRNA 向量是有用的陰性控制，將激活 RISC 和 RNAi 通路，但不針對任何人類或小鼠基因。非哺乳動物非靶向控制已被發現可以靶向 tGFP 的一部分。如果您正在用表達 tGFP 的細胞系做實驗，您應該考慮購買我們最新的非靶點 shRNA 對照，它已經被生物資訊學判定為不針對任何物種的任何基因。這樣就可以檢驗 shRNA 轉導和 RNAi 啟動對基因表達的影響。用非靶點 shRNA 媒體轉染的細胞也可提供有用的參考，以解釋基因敲除的情況。

TurboGFP shRNA (SHC204, SHC204V)
由於 TurboGFP 的 shRNA 並不針對任何已知的人類或小鼠基因，因此可在許多 shRNA 實驗中作為非針對性對照。

TRC2 Positive Controls for Transduction/Transfection

TurboGFP Control vector (SHC203, SHC203V)
此載體是測量轉染效率和優化 shRNA 傳遞的有用對照。TurboGFP™ 控制載體由慢病毒骨架載體 TRC2-pLKO-puro 組成，含有由 CMV 促動子驅動的 TurboGFP 編碼基因。轉染此載體可快速目視確認轉染和傳輸是否成功。

TRC2 用於敲除的陽性對照

TurboGFP shRNA (SHC204, )。a title="SHC204V" href="/TW/zh/product/SIGMA/SHC204V">SHC204V)
TurboGFP的shRNA載體由TRC2-pLKO-puro載體組成，含有針對TurboGFP的shRNA，可作為陽性對照快速觀察基因敲除。實驗證明，此 TurboGFP shRNA 對照物在 HEK293T 細胞中 24 小時後可使 GFP 表達降低 99.6%。

Inducible shRNA Controls

Inducible shRNA對照說明

注意：所有對照的向量圖可在 shRNA向量圖頁面找到。

可誘導型 shRNA 陰性對照

未處理的細胞
對於任何好的實驗，陰性對照的第一個建議是未處理的細胞。未處理的細胞將為比較所有其他樣本提供一個參考點。

Inducible Non-Targeting shRNA Controls (SHC312, SHC312V, SHC332SHC332V)
這些MISSION非靶向誘導性shRNA載體是有用的陰性對照，它們會激活RISC和RNAi通路，但不會在任何物種中靶向任何已知基因。這樣就可以檢驗 shRNA 轉導和 RNAi 啟動對基因表達的影響。以非靶點誘導性 shRNA 媒體轉染的細胞也將為詮釋基因敲除提供有用的參考。

誘導型 TurboGFP shRNA and 誘導型 Luciferase shRNA 
由於這些誘導型 shRNA 並不針對任何已知的人類或小鼠基因，因此可在許多誘導型 shRNA 實驗中作為非針對性對照。

sh敲除的 RNA 控制

誘導性 TurboGFP shRNA 
MISSION誘導性 TurboGFP shRNA 載體由 pLKO.5-puro载体，含有靶向TurboGFP的shRNA，可作为阳性对照快速观察基因敲除。這些 TurboGFP shRNA 對照經實驗證明可在 HEK293T 細胞中 24 小時後減少 99.6% 的 GFP 表達。

誘導型螢光素酶 shRNA 
MISSION誘導型螢光素酶 shRNA 載體由 pLKO.5-puro载体，含有针对北美萤火虫荧光素酶的shRNA插入。這些對照可用作陽性對照，以快速確認基因敲除。

參考資料

1. Stewart SA, et al. 2003. Lentivirus-delivered stable gene silencing by RNAi in primary cells. . RNA . 9, 493–501

2. Donello JE, et al.. 1998. Woodchuck hepatitis virus contains a tripartite posttranscriptional regulatory element.. J. Virol.(72, 5085-92):

MISSION是Sigma-Aldrich Co.LLC
TurboGFP、TagCFP、TagYFP、TagRFP、TagFP635 是 Evrogen 的商標。