Western Blotting 樣品製備
良好的樣品準備的重要性再怎麼強調也不為過。透過瞭解起始樣本的性質，並清楚瞭解您希望從 Western 印跡實驗中獲得的資訊，您就能增加分析成功的機會。
原則上，所有來源的蛋白質，從單細胞到整個組織，以及細胞外基質、生物液體和體外分泌的蛋白質，都可以用 Western 印跡進行分析。在溫和的條件下，懸浮中的哺乳動物細胞等來源很容易被破壞，並且很容易釋放蛋白質，但要從深埋在完整組織或實體腫瘤內的細胞中萃取蛋白質則比較困難。從植物、細菌和真菌中萃取蛋白質會因為包圍和保護活細胞的堅硬、富含碳水化合物的細胞壁的存在而更加複雜。
然而，無論蛋白質的來源和興趣點為何，我們的目標都必須是設計一個足夠強烈的萃取程序來進入和破壞細胞，而又不會對興趣點的蛋白質造成不可逆的改變，同時在可接受的純度水平下獲得足夠的材料產量！
- 盡可能使用溫和的萃取程序：過度激烈的細胞或組織破壞可能會直接使目標分子變性、形成永久性的蛋白質複合物、造成化學修復，或導致分離的蛋白質分解酵素釋出。
- 快速萃取蛋白質，可能的話在冰上進行，並在適當的緩衝液存在下，以維持pH值、離子強度和穩定性，以防止蛋白質降解。預先冷卻設備，並將樣品一直保存在冰上。
生物基質是複雜的。除了核酸、多醣體和脂質之外，目標蛋白質很可能是樣品中成千上萬的蛋白質之一，而所有這些蛋白質都可能干擾分析。萃取與純化所投入的心力取決於最終目標；舉例來說，如果目的是檢測含量較低的蛋白質，建議使用免疫沉澱等技術從樣本中親和分離出特定蛋白質。
萃取方法的選擇主要取決於樣本，以及分析的目標是細胞中的所有蛋白質，還是只針對特定亞細胞部分中的某種成分。
此外，由於細胞破壞時可能會釋放出內源蛋白質酶，並可能降解目標分子，因此在細胞破壞和隨後的純化過程中，應使用雞尾酒蛋白質酶抑制劑來保護樣本，以避免蛋白質的失控損失。
有許多方法可用來破壞細胞，並製備其內容物，以進行 Western 印迹分析。 表 1 列出一些最常用的萃取方法，並指出這些方法適用於處理特定的細胞或組織來源。一般而言，當樣本是容易裂解的培養細胞或血細胞時，會使用較溫和的方法，而對於較堅韌的細菌或植物細胞，或嵌入結締組織的哺乳類動物細胞，則會使用較強力的方法來破壞。
| Sample | 典型裂解選項 |
|---|---|
| 組織培養 | 洗滌劑裂解 |
| 細胞懸浮液 | 超聲波 |
| 大多數植物及動物組織 | 機械均質化（例如：攪拌） |
| 植物及動物組織 | |
| 軟性動物組織和細胞 | Dounce（手動）和/或 Potter-Elvehjem （機械）均質 |
| 細菌及哺乳類動物細胞 | 冷凍/融解 |
| 細菌、紅細胞、培養細胞 | 滲透震盪裂解 |
| 固體組織及植物細胞 | 使用研杵進行手工研磨 |
| 細胞懸浮液、酵母細胞 | 使用研磨成分進行研磨 (e.)g.沙、玻璃珠、氧化鋁）研磨 |
| 細菌、酵母、植物組織、真菌細胞 | 酶消化 |
| 細菌、酵母、植物細胞 | 爆炸性減壓（氮氣空化）< |
| 具細胞壁的微生物 | 法式壓榨 |
| 植物組織、真菌細胞 | 玻璃珠研磨 |
蛋白萃取選項
洗滌劑型裂解
洗滌劑型裂解是處理哺乳動物細胞最常選擇的方法。將細胞懸浮液輕輕地離心，然後在含有洗滌劑的裂解液中重新懸浮。細胞膜被溶解，細胞裂解並釋放出其內含物。纖維母細胞等黏附性細胞可直接在組織培養物表面加入溶解液溶解，也可以在有非溶解緩衝液的情況下，先用橡皮刀從表面刮下，離心後再作為細胞懸浮液處理。使用溫和的非離子洗滌劑，例如 Triton** X-100、壬基苯氧基聚乙氧基乙醇 (NP40) 或滋養離子洗滌劑，例如 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]-1-propanesulfonate（CHAPS），有助於確保目標蛋白質的變性保持在最低水平。
冷凍/解凍裂解
此方法適用於哺乳動物或細菌細胞的懸浮液。冷凍/解凍裂解法的主要優點是簡單、成本低。細胞會因重複形成冰晶而被破壞，此方法通常與酵素裂解結合使用。可使用液氮快速冷凍細胞懸液。然後將樣品解凍，在室溫下以移液管或輕輕攪拌的方式將樣品重懸於裂解緩衝液中，並重複此過程數次。
滲透震盪
這是一種非常溫和的方法，不需要使用洗滌劑就足以裂解懸浮的哺乳動物或細菌細胞。這種方法通常與機械破壞結合，依靠從高滲透介質到低滲透介質的變化，非常適合用於裂解液後續分離成亞細胞成分的應用。
超聲波萃取
這種蛋白質萃取方法最常應用於細胞懸浮液。透過插入樣品中的探針，以高頻音波（通常為 20 至 50 kHz）破壞細胞。聲波會產生一個低壓區域，造成探針頂端附近的
細胞膜破壞。細胞懸浮液應進行短暫的聲波處理，以避免加熱，而在兩次聲波處理之間，樣品應在冰上冷卻。此方法適用於小規模的樣品製備。蛋白質的聚集體（包涵體）必須被溶解。
注意：對於蛋白質製備，DNA 的釋放可能會導致難以處理的高粘度樣品。
機械方法
蛋白質可以使用許多粗糙但有效的"粉碎和研磨"措施從細胞和組織中提取。例如，當樣品被迫通過一個狹窄的間隙時，細胞膜可能會被 液體剪切力 破壞：間隙越小，剪切力越大。這可以藉由手動的 dounce 均質或機械的 Potter-Elvehjem 均質來實現。
在冷凍緩衝液中切碎或剁碎的組織，可使用 Waring 攪拌器或 Polytron 進行均質化。Polytron 與 Waring 攪拌器的不同之處在於，它將組織吸入包含旋轉刀片的長軸中。有不同容量的軸可供選擇，可容納小至 1 mL 的樣品：組織或細胞通常會在液氮中冷藏，然後磨成細粉。加入氧化鋁或砂可幫助研磨。
玻璃珠研磨：使用細玻璃珠快速攪拌細胞，可破壞細胞壁。玻璃珠研磨可溶解大部分革蘭陽性和革蘭陰性細菌，包括分枝桿菌。
酵素消化
從細菌、酵母或其他細胞膜被堅固的保護結構包圍的生物中提取蛋白質時，經常使用酵素方法。酵素會溶解細胞壁、外衣、膠囊、殼體或其他單靠機械方法不易剪切的結構。酵素消化後通常會在裂解緩衝液中進行均質化、音響處理或強力渦旋處理。酵素方法最常用於處理細菌和酵母，但也可用於從嵌入纖維組織的真核細胞中萃取蛋白質，例如，膠原蛋白酶可能適合加強纖維膠原蛋白的分解（表 2）。
| Enzyme | Description | Comments | |||
|---|---|---|---|---|---|
| 溶菌酶又稱為muramidase或N-acetylmuramide glycanhydrolase，是酵素家族中的一種 。br /> that damage bacterial cell walls by catalyzing hydrolysis of 1, 4-β-linkages between N-acetylmuramic acid and N-acetyl-D-glucosamine residues in a peptidoglycan and between N-acetyl-D-glucosamine residues in chitodextrins | Zymolyase** | 主要的酵素活性為 β-1，3-葡聚糖酵素和 β-1，3-葡聚糖片段水解酵素，可在β-1，3-葡聚糖連結處水解葡萄糖聚合物。-1、3-葡聚糖連結處水解葡萄糖聚合物，釋放出片糖作為主要產品 | Lysostaphin A | Staphylococcus simulans金屬內肽酶，對葡萄球菌的細胞壁肽聚糖有特異性 | 主要用於葡萄球菌 能發揮極強的抗葡萄球菌功能 |
Explosive Decompression
此技術最常應用於細菌、酵母、植物細胞或其他強韌的樣品。細胞會在高壓 (通常為 5500 kPA/800 psi) 下與惰性氣體 (例如氮氣) 達到平衡。使用法式壓片機，當樣品從高壓的腔室經由孔口進入低壓的腔室時，壓力會快速下降。
預製裂解緩衝液和樣品製備套件
Cytiva提供一系列產品，用於從哺乳動物細胞、酵母、細菌和動物組織中提取蛋白質。
樣品研磨套件 可用於破碎小組織和細胞樣本以提取蛋白質。每支管子最多可處理 100 mg 樣品，約需 10 分鐘。本套件由微量離心管及一次性研磨杵組成，每支離心管含有少量懸浮於水中的研磨樹脂。先將試管離心，使樹脂沉澱，然後去除水分。然後將所選的萃取液和樣品加入試管中，再用研磨杵研磨樣品。離心後，細胞殘渣和研磨樹脂會牢牢地固定在管子的圓錐形底部，上清液很容易就會被移除
The illustra™triplePrep™試劑盒 專為從未分離過的動物組織和哺乳動物細胞樣本中快速分離和純化高產率基因組 DNA、總 RNA 和總變性蛋白質而設計。
哺乳動物蛋白質萃取緩衝液 是專為從哺乳動物培養細胞中高效、溫和地萃取具有生物活性的總可溶性蛋白質而設計。
酵母蛋白提取緩衝液套件 用於從酵母細胞中提取可溶性蛋白，是對基於zymolyase的球形細胞製備和從酵母細胞中提取可溶性蛋白的專利改進。本試劑盒提供了製作球形細胞的方案，並在裂解和提取酵母蛋白前去除溶菌酶 Zymolyase。緩衝液是以含有溫和的非離子洗滌劑的有機緩衝劑為基礎，並結合各種鹽和劑的專利組合，以提高 28-9998-97 AB 19 蛋白質的萃取和穩定性。此外，還提供即用型 Zymolyase 製劑。視應用情況而定，可加入還原劑、螯合劑及蛋白酶抑制劑等其他劑型。
酵母蛋白萃取緩衝液試劑盒免除了對酵母細胞進行費時費力的玻璃珠裂解。
2-D 分離試劑盒可減少凝膠基質中蛋白質的數量和種類，從而簡化複雜蛋白質混合物的分析。分離技術可從總蛋白質體中分離出多組蛋白質或多個片段。這可提高分析個別部分時的解析度，提供較少擠迫的 2-D 圖，簡化分析與詮釋，並增加發現具有診斷或治療意義的新蛋白質的機會。這些可擴充的試劑盒有助於確保高樣本回收率，並與下游分離技術相容，例如 2-D 凝膠電泳。
保護您的樣品
裂解緩衝液中必須加入蛋白酶抑制劑，以防止細胞裂解過程中內源蛋白酶釋放後蛋白質的降解。Cytiva 提供這種獨特的競爭性和非競爭性蛋白酶抑制劑組合，可保護蛋白質在從動物組織、植物組織、酵母和細菌純化過程中不被蛋白水解。此雞尾酒含有絲氨酸、半胱氨酸和鈣蛋白酶的抑制劑，可有效抑制 95% 以上的蛋白酶活性，是專為 2-D 凝膠電泳研究中的樣品製備而開發的。
儘管在蛋白質萃取過程中保持蛋白酶處於非活性狀態是很重要的（表 3），但也應該考慮到其他可能造成損害的污染物。例如，如果您的 Western 印跡的目的是檢測磷酸化蛋白，則必須保護您的樣品免受在樣品製備過程中釋放到裂解液中的磷酸酶的去磷酸化作用。保護樣本的一種方法是在裂解緩衝液中加入磷酸酶抑制劑（如釩酸鈉）。也可能需要保護您的蛋白質免於不必要的修飾，例如乙醯化、泛素化或糖基化。
| Inhibitor | Aprotinin | 也可抑制相關蛋白分解酵素 | |
|---|---|---|---|
| 糜蛋白酶、糜蛋白酶類絲氨酸蛋白酶、糜蛋白酶和溶酶體半胱氨酸蛋白酶 | 植物萃取物的常用雞尾酒成分 | ||
| Leupeptin | 半胱氨酸、絲氨酸和蘇氨酸蛋白酶 | Pefabloc** | 不可逆抑制剂。特異性與苯甲基磺酰氟 (PMSF) 相似，但在低 pH 值下更穩定 |
| Pepstatin | 高效抑制幾乎所有酸性蛋白酶 常見的雞尾酒成分 | ||
| PMSF | 在水中迅速降解。儲備溶液通常是在溶劑中製成，例如二甲基亞硫醚 (DMSO) 會被還原劑（例如二硫蘇糖醇 (DTT) 和 β-巯基乙醇）失活 |
樣品清理
在一維凝膠電泳之前通常不需要處理樣品，但在二維凝膠電泳應用中卻非常重要。不過，如果您在分離過程中遇到問題，例如條帶模糊，樣品清理可以去除可能的干擾化合物，例如核酸、多醣體和鹽類，從而改善性能。例如，添加 DNase 可以解決核酸釋放造成的黏度問題。 表 4 列出常見的污染物和處理選項。
| 污染物 | 技術 | |
|---|---|---|
| 三氯乙酸（TCA）/丙酮沉澱 將樣品沉澱於三氯乙酸、硫酸銨1 或苯酚/乙酸銨中，然後離心 將樣品溶解於十二烷基硫酸鈉 (SDS) 或高 pH2 | ||
| 不溶物質可能會阻塞凝膠的孔隙Ionic detergents | 離子去垢劑，如SDS，通常用於蛋白質的提取和溶解，但會強烈干擾某些下游分析 | 稀釋成含有齊羥離子或非離子去垢劑的溶液，如CHAPS、Triton X-100或NP40 丙酮沉澱 |
进阶模式  进阶模式提供了更全面性的UEFI BIOS环境，是特别针对想拥有计算机硬件有最大幅度超控性的超频玩家和重度使用者所设计的。
脂質會與去垢劑形成不溶性的複合物，降低去垢劑作為蛋白質增溶劑的效能 當將富含脂質的組織萃取物離心時，通常會有一層難以去除的脂質層 | 強變性條件和去垢劑可將蛋白質與脂質的相互作用減至最低 - 過量的去垢劑可能是必要的 用丙酮沉澱可去除部分脂質 用TCA、硫酸銨或苯酚/乙酸銨沉澱樣品，然後離心1 將樣品溶解於 SDS 或高 pH2 | |
| Phenolic compounds | Phenolic compounds are present in many plant tissues and can modify proteins through an enzyme-catalyzed oxidative reaction | The presence of a reducing agent, such as DTT or β-mercaptoethanol during extraction reduces phenolic oxidation Rapidly separate proteins from phenolic compounds by precipitation 以二乙基二硫代氨基甲酸或硫脲等抑制劑使多酚氧化酶失活 透過吸附於聚乙烯吡咯烷酮(PVP)或聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)上去除酚類化合物< |
有些多醣體帶負電，可以藉由靜電作用與蛋白質複合 | 將樣品沉澱於TCA、硫酸銨或苯酚/醋酸銨中，然後離心1 超速離心將移除高分子量的多醣體 將樣本溶解於 SDS 或高 pH 值的溶液中2< | |
| Salts, residual buffers, and other charged small molecules carried over from sample preparation< | 透析 旋轉透析 凝膠過濾 沉澱/重懸浮 | |
| Nucleic acids | Disturbs migration and clogs the wells | Add DNase |
| 1 使用硫酸銨沉澱需要後續的脫鹽步驟。 2 對於 2-D 凝膠電泳，必須去除 SDS。 | ||
樣品清理產品
SDS-PAGE清理試劑盒 專為製備因含有鹽分或蛋白質濃度較低而難以分析的樣品而設計（圖1）。本試劑盒使用沉澱劑和共沉澱劑的組合來定量沉澱樣品蛋白質，而將去垢劑、鹽類、脂質、酚類和核酸等干擾物質留在溶液中。蛋白質經由離心處理沉澱。進一步洗滌沉積物以去除非蛋白質污染物，然後再次離心。所得的沉澱物會重新懸浮，與 SDSPAGE 樣品緩衝液混合並加熱。樣品即可進行 SDS-PAGE。此程序可在 2 小時內完成。
圖 1.SDS-PAGE清理套組與乙醇沉澱的比較。(A)以 10 公升乙醇沉澱的尿液蛋白。(B)使用 SDS-PAGE Clean-Up Kit 沉澱的尿液蛋白。凝膠：8 × 9 cm，12.5% 丙烯酰胺，0.1% SDS，運行於 SE 260 Mini-Vertical Unit。染色：染色：Coomassie**藍 R-250。
2-D Clean-Up Kit 設計用於準備 2-D 凝膠電泳（圖 2）的樣本，但也可用於 Western Blotting 應用。該試劑可定量沉澱蛋白質，而將去垢劑、鹽類、脂質、酚類和核酸等干擾物質留在溶液中。使用 2-D Clean-Up Kit 處理樣品，可大幅改善 2-D 凝膠電泳結果的品質，減少條紋、背景染色及其他假象。有關 2-D Clean-Up Kit 的更多資訊，請參閱 Cytiva 的 2-D Electrophoresis, Principles and Methods Handbook (2)。
圖 2.2-D Clean-Up Kit 可消除殘留 SDS 造成的大部分水平條紋。樣品：用 4% SDS、40 mM Tris 基底提取的大鼠肝臟。第一維：約 20 μg 大鼠肝臟蛋白，Immobiline™ DryStrip (pH 4-7, 7 cm)。Ettan™ IPGphor™ 3 等電聚焦裝置單元 17.5 kVh。第二維：SDS-PAGE (12.5%), run on SE 260 Mini-Vertical Unit (8 × 9 cm gel)。染色：PlusOne™ 銀染色套件，蛋白質。
去除血清或血漿樣本中的高豐度蛋白質
使用 Western 印跡法檢查血漿或血清時，白蛋白和 IgG 等豐度較高的血漿蛋白質可能會掩蓋豐度較低的蛋白質的信號。HiTrap™ Albumin &; IgG Depletion 等預包柱可去除樣品中這些可能有問題的蛋白質，分別去除 95% 的白蛋白和 90% 的 IgG。
HiTrap Albumin & IgG Depletion 1 mL 色譜柱設計用於去除約 150 μL 未稀釋人體血漿或血清樣本中的白蛋白和 IgG，這些樣本含有正常水平的白蛋白 (~40 mg /mL) 和 IgG (~15 mg/mL)。耗盡程序約需 35 分鐘，可使用 ÄKTA™ 設計平台的液相層析系統、蠕動泵或手動注射器進行。當使用較小容量時，建議使用 Albumin & IgG Depletion SpinTrap™，專為 ~50 μL 人體血漿或血清容量而設計。
樣品的脫鹽與濃縮
將您的樣品應用於電泳膠之前，溶劑中不能含有過量的鹽分或其他低分子量污染物。樣品中的鹽含量過高可能會導致蛋白質以不一致且不可預測的模式遷移。脫鹽可在凝膠過濾的基礎上單步完成，同時將樣品轉換到所需的緩衝液中。然而，脫鹽與緩衝液交換程序通常會造成樣品稀釋。在電泳應用中，需要相對較高的樣品濃度才能獲得良好的結果，因此樣品濃縮可能是必要的。
表 5中概述了 Cytiva 提供的一些脱盐和浓缩产品。
| 產品 | 排除極限 (Mr) | 化學穩定性 | ||||||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1.0 至 2.5 mL | >90% | 70 to >95% | 5000 | All commonly used buffers | ||||||||||||||
| PD MidiTrap™ G-25/G-10 | 0.5 至 1.0 mL (G-25) 0.4 to 1 mL (G-10) | >90% | 70 to 90% | 5000 (G-25) 700 (G-10) | PD MiniTrap™ G-25/G-10 | 0.1 to 0.5 mL (G-25) 0.1 to 0.3 mL (G-10) | >90% | 70 to 90% | 5000 (G-25) 700 (G-10)< | 0.25 to 1.5 mL | >99% | 95% | 5000 | Vivaspin** | 0.1 至 20 mL | 1 | >95% | 所有常用緩衝液 |
| 1 Vivaspin色譜柱專爲樣品濃縮而設計，但也可用於緩衝液交換。 | ||||||||||||||||||
釐定總蛋白濃度
比較同一凝膠內不同泳道或不同凝膠間的樣本蛋白量時，非常重要的一點是所有泳道都載有相同的蛋白總量。
如果比較品道中的蛋白質總量是同一品道的兩倍，則某一特定蛋白質在同一品道中的表達量增加兩倍的情況會被完全掩蓋（如果比較品道中的蛋白質總量是同一品道的兩倍以上，則表達量甚至會看起來減少）。這些方法包括測量蛋白質的內在紫外線 (UV) 吸光度，以及基於蛋白質依賴性顏色變化的方法，例如經典的、基於銅的 Lowry 分析法 (4)、Smith 銅/bicinchoninic 分析法 (BCA) (5) 和 Bradford 染料分析法 (6)。
舉例來說，紫外線吸收法需要在沒有干擾（紫外線吸收）物質的溶液中取得已知消光係數的純蛋白質。溶液中蛋白質的近似濃度（假設使用通路長度為 1 cm 的比色皿）可通過以下任一方程式估算；
A280 = 1 A1 (mL/cm mg) × [Conc.) (mg/mL) × 1 (cm)
A205 = 31 A1 (mL/cm mg) × [Conc.] (mg/mL) × 1 (cm)
1 A280 代表蛋白質在 280 奈米處吸收的光，主要是由於環狀氨基酸酪氨酸和色氨酸的存在。A205 A205 代表蛋白質在 205 奈米處吸收的光，主要是氨基酸之間的肽鍵所造成的。
然而，不同的蛋白質在 280 奈米和 205 奈米處的消光係數差異很大，因此以這種方式得到的濃度估計值充其量只是一個粗略的估計。
銅/BCA 分析 是以 Cu2+ 被酰胺還原為 Cu+ 為基礎。這些檢測雖然相當精確，但需要新製備的試劑溶液，而且在檢測過程中必須仔細測量和混合試劑溶液。之後，還需要在嚴格控制的高溫下進行長時間、精確定時的孵育，然後立即進行吸光度測量。這兩種檢測都可能會受到生化溶液中常見的其他物質影響，包括去垢劑、脂質、緩衝液和還原劑 (3)。
Bradford染料分析 是基於Coomassie Blue G染料的三種形式之間的平衡。在強酸條件下，染料的雙質子化形式（紅色）最為穩定。
與上述其他檢測方法相比，Bradford 染料檢測速度更快、混合步驟更少、不需要加熱，而且比色反應更穩定。不過，此分析法容易受到非蛋白質來源的影響，尤其是去垢劑，而且在其有用蛋白質濃度範圍的高端，其線性會逐漸變差。其反應也會因蛋白質的結構而異。
布拉德福德染料試劑主要與精氨酸殘基反應，其次與組氨酸、賴氨酸、酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸殘基反應。因此，該檢測對於基本蛋白質或酸性蛋白質的精確度較低，且對牛血清白蛋白的敏感度比一般蛋白質高約 2 倍。IgG是Bradford染色法的首選蛋白質標準。
用於測定總蛋白質濃度的產品
在蛋白質分析中，紫外/可見分光光度計的使用非常廣泛。以 Cytiva 的 Ultrospec™ 分光光度計系列為例，可提供用於蛋白質測定、酵素活性動力學、DNA 與 RNA 定量以及餾分分析的模組。這些單元與上述傳統蛋白質測定方法相容。這些儀器配備了八個位置的樣品更換器，是使用 2-D Quant Kit 進行蛋白質濃度測定的最佳選擇。
此外，Novaspec™ Plus 可見光分光光度計還儲存了 Bradford 染料分析法、BCA、Biuret 和 Lowry 分析法等蛋白質濃度測定方法，以及吸光度、透射率、OD600 和濃度等基本模式。
2-D Quant Kit，儘管名稱如此，卻可用於許多不同的應用，包括精確測定樣品中的蛋白質濃度。此程序的原理是定量沉澱蛋白質，同時留下干擾物質。該檢測是基於銅離子與任何蛋白質的多肽骨架的特異性結合。沉澱的蛋白質會重新懸浮在含銅溶液中，並使用比色劑測量未結合的銅。480 nm 處的吸光度與蛋白質濃度成反比。該檢測對蛋白質濃度的線性反應範圍為 0 至 50 μg/mL，建議使用的樣品量為 1 至 50 μL。此外，2-D Quant Kit 與多種樣品製備技術（如 SDS）中使用的大多數試劑相容。
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參考資料
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