使用 Superdex 進行分離

緩衝液：10 至 50 mM 磷酸鈉，150 mM 氯化鈉，pH 7.0 至 7.4，或選擇下一步驟應儲存或溶解樣品的緩衝液。

使用 150 mM 氯化鈉，或具有相等離子強度的緩衝液，以避免 pH 依賴性的離子與基質互動。在非常低的離子強度下，介質上少量負電荷基團的存在會導致基本蛋白質的滯留。

樣品應完全溶解。離心或過濾以去除微粒物質（附錄 3）。務必使用脫氣緩衝液，並在運行過程中保持恆溫，以避免將空氣引入色譜柱。

在色譜系統上設定適當的壓力限制，以避免損壞色譜柱填料。

首次使用或長期儲存後

1. 用 2 柱容量的水平衡色譜柱，去除儲存溶液。使用低流速 (表 2.3)，以避免形成任何間隙。
2. 首次使用：根據第 設定色譜柱壓力限值 (第 1 章)，確定色譜柱特定壓力限值。
3. 進行柱效率測試（附錄 1）。
4. 在運行過程中，以建議流速用 2 柱容量的含 150 mM 氯化鈉的緩衝液進行平衡（表 2.2）。
5. 使用相當於柱容量 0.5% 至 4% 的樣品容量。對於大多數應用，上樣量不應超過 2%，以獲得最高解析度（3.2/300 GL 和 5/150 GL 最多 50 μL，10/300 GL 最多 500 μL，HiLoad 16/600 最多 2.4 mL，HiLoad 26/600 最多 6.4 mL）。
6. 用1個柱容量的緩衝液進行膨脹。
7. 在使用新的樣品之前，用緩衝液重新平衡柱子，直到在A₂₈₀ 監測到的基線穩定為止。

應定期檢查色譜柱性能，確定每米理論板數和峰對稱性。

確保不超過色譜柱的壓力限值，並考慮流量限制（表 1.3）。這一點在低溫工作時尤為重要，例如在冷室中工作，或者色譜柱使用 20% 乙醇或其他粘性溶液時。暴露在 4 °C 至 40 °C 範圍以外的溫度下會對填料床的效率產生負面影響，色譜柱將需要重新填料。

表 2.3. 使用含有Superdex Increase、Superdex或含有Superdex預製級介質的HiLoad柱的預填充柱在不同階段的建議流速

 

 

室溫下的流速 *HiLoad 為節省時間，可用較高的流速與緩衝液平衡：HiLoad 16/600 和 HiLoad 26/600 分別為 1.6 mL/min 和 4.3 mL/min。在運行過程中，將流速降至建議流速，然後再進行樣品應用。

	3.2/300 GL	5/150 GL	10/300 GL	HiLoad 16/600	HiLoad 26/600
首次使用或長期儲存後	0.05 mL/min	0.3 mL/min	0.5 mL/min	1 mL/min* (30 cm/h)	2.6 mL/min* (30 cm/h)
首次使用或長期儲存後 (Superdex 200 Increase)	0.075 mL/min	0.3 mL/min	0.75 mL/min	N/A	N/A
就地清潔，CIP	0.02 mL/min	0.3 mL/min†	0.5 mL/min	0.8 mL/min (25 cm/h)	2.2 mL/min (25 cm/h)

† 0.13 mL/min for Superdex 200 Increase 5/150 GL.

清洗

1. 用 1 柱体积的 0.5 M 氢氧化钠或 0.5 M 乙酸清洗。
2. 立即用 1 柱体积的蒸馏水清洗，然后用至少 2 柱体积的缓冲液清洗，直到 A₂₈₀  和洗脱液的 pH 值稳定。

如果緩衝液中含有洗滌劑，可能需要進一步的平衡。

建議每 10 到 20 次分離後進行例行清洗，但清洗頻率也取決於應用樣品的性質。

用4柱体积的1M NaOH（去除疏水性蛋白质或脂蛋白）清洗，然后用4柱体积的蒸馏水清洗。

用0.5柱体积的30%异丙醇清洗，去除脂类和非常疏水性蛋白质，然后用2柱体积的蒸馏水清洗。

在開始新的分離之前，用至少 5 個柱容量的緩衝液平衡色譜柱，或直到在 A₂₈₀ 監測到的基線和洗出液的 pH 值穩定為止。

對於極端污染情況，請查看產品隨附的說明。