離子交換色譜法和色譜聚焦法的色譜柱清洗

正確準備樣品和緩衝液，並在每次分離結束時進行高鹽分清洗（1 M NaCl），應能使大多數色谱柱保持良好狀態。然而，性能降低、流速緩慢、背壓增加或完全堵塞都表明介質需要使用更嚴格的程序進行清洗，以去除污染物。

建議在色譜柱清洗時顛倒流動方向，這樣污染物就不需要通過色譜柱的整個長度。每個清洗步驟所需的色谱柱容量和時間可能因污染程度而異。如果清除常見污染物的清潔步驟無法恢復色譜柱性能，請在嘗試其他清潔方法之前更換頂部過濾器（如可能）。更換過濾器時應小心，因為這可能會影響色谱柱填料並干擾性能。

去除常見污染物

以下程序應能滿足去除常見污染物的要求：

1. 用至少 2 柱容量的 2 M NaCl（表 21 為推薦流量）清洗。
2. 用至少 4 柱容量的 1 M NaOH 進行清洗（流量與步驟 1 相同）。
3. 使用至少 2 個柱容量的蒸餾水進行清洗（流程與步驟 1 相同），直到 UV 基線和洗出液的 pH 值穩定為止。
4. 使用至少 4 個柱容量的啟動緩衝液或儲存緩衝液進行清洗（流程與步驟 1 相同），直到 pH 值和電導率值達到要求為止。

去除沉澱的蛋白質、脂質、疏水結合的蛋白質或脂蛋白

去除沉澱的蛋白質：

1. 注入1柱容量的胃蛋白酶（1 mg/mL in 0.5 M NaCl, 0.1 M acetic acid）。
2. 用至少 2 柱容量的蒸餾水（表 21 中的建議流量）沖洗，直到 UV 基線和洗出液 pH 穩定為止。
3. 使用至少 4 柱容量的起始緩衝液或儲存緩衝液進行清洗，流量與步驟 2 相同，直到洗出液的 pH 值和電導率達到要求值。

另外，

1. 用 2 柱体积的 6 M 盐酸胍清洗（表 21 中的推荐流量）。
2. 立即用至少5柱体积的pH值为7-8的缓冲液（表21中的推荐流量）清洗。
3. 用至少2柱体积的蒸馏水（与步骤2相同的流量）冲洗，直到UV基线和洗脱液的pH值稳定。
4. 使用至少 4 柱容量的起始緩衝液或儲存緩衝液進行清洗（流量與步驟 2 相同），直到 pH 值和電導率值達到要求。

表 21 根據介質、色譜柱尺寸和洗滌劑建議流量。

色柱（容量）或介質	水、緩衝液、2 M NaCl 或 1 M NaOH+	70%乙醇或30%异丙醇
MiniBeads (0.24 mL)	0.2 mL/min	0.1 mL/min	0.1 mL/min
MiniBeads (0.8 mL)	0.2 mL/min	0.1 mL/min	0.1 mL/min
MonoBeads（1.7 mL）	0.2 mL/min	0.1 mL/min	0.1 mL/min
MonoBeads (1 mL)	0.5 mL/min	0.25 mL/min	0.25 mL/min
MonoBeads (8 mL)	2 mL/min	1 mL/min <	1 mL/min
MonoBeads (20 mL)	5 mL/min	2.5 mL/min	2.5 mL/min
SOURCE 15 4.6/100 PE	0.2 mL/min	0.1 mL/min	0.1 mL/min
RESOURCE 1 mL	1 mL/min	0.5 mL/min	0.5 mL/min
RESOURCE 6 mL	6 mL/min<	3 mL/min	3 mL/min
40 cm/h	20 cm/h	20 cm/h
HiTrap (1 mL)	1 mL/min	0.5 mL/min	0。5 mL/min
HiTrap (5 mL)	5 mL/min	2.5 mL/min	2.5 mL/min
HiPrep (20 mL)	5 mL/min	2.5 mL/min	2.5 mL/min
HiLoad (20 mL)	3 mL/min	2.5 mL/min	2。5 mL/min
高負荷 (53 mL)	8 mL/min	5 mL/min	5 mL/min
Sepharose High Performance inlarger columns**	40 cm/h	20 cm/h	20 cm/h
Sepharose Fast Flow in larger columns**	40 cm/h	20 cm/h	40 cm/h
Sepharose XL 大柱**	40 cm/h	20 cm/h	40 cm/h
Sepharose Big Beads**	40 cm/h<	40 cm/h	40 cm/h

* 如果認為污染嚴重，在使用 1 M NaOH 時，請使用較低的流速以增加接觸時間。
** 在清洗較大的色譜柱時，對於用作初始清洗步驟的任何溶液，請預留 1-2 小時的接觸時間。

去除脂質、疏水結合蛋白或脂蛋白

要完全去除此類污染物，可能需要使用有機溶劑或洗滌劑。

使用有機溶劑前，請用至少 4 柱容量的蒸餾水清洗介質，以避免任何鹽分沉澱在色譜柱上。

使用有機溶劑或溶液時，可能需要降低流速，以避免對色谱柱造成過大壓力。

使用清潔溶液，例如最高 100%異丙醇、最高 100%甲醇、最高 100%乙腈、最高 2 M NaOH、最高 75%乙酸、最高 100%乙醇、離子或非離子清潔劑。

請務必在培養基或色谱柱隨附的說明書中檢查溶劑相容性。

避免使用帶有 Q、DEAE 和 ANX 電荷基團的陰離子洗滌劑。

清洗程序示例：

1. 用4柱体积的最高70%乙醇或30%异丙醇清洗（建议流量见表21）。
2. 用至少2柱体积的蒸馏水冲洗（推荐流量见表21），直到UV基线和洗脱液pH值稳定。
3. 立即用3柱体积的启动缓冲液冲洗（流量与步骤2相同）。

或者，

1. 用 2 柱体积的碱性或酸性溶液中的洗涤剂清洗，例如 0.1-0.5% 非离子洗涤剂在 0.1 M 醋酸中的 0.1-0.5% 非離子洗滌劑進行清洗（建議流量請參閱表 21）。
2. 用 5 柱容量的 70% 乙醇進行沖洗，以去除殘留的洗滌劑（建議流量請參閱表 21）。
3. 用至少 2 柱容量的蒸餾水（流量與步驟 1 相同）沖洗，直到 UV 基線和洗出液 pH 穩定為止。
4. 用 3 柱容量的起始緩衝液（流量與步驟 1 相同）沖洗。