流式細胞計指南

流式細胞計法是一種用於分析細胞的實驗室技術。回顧流式細胞計量的基礎知識、免疫檢測方法、關鍵的流式細胞計量協議步驟和適當的控制，有助於確保準確地進行流式細胞計量分析。請繼續閱讀，找出能讓您下一次流式細胞計量實驗成功的秘訣。

• 什麼是流式細胞計量？
• 主要流式細胞計步驟
• 適當的控制

什麼是流式細胞計學？

流式細胞計學是一種功能強大的技術，可根據異質懸浮細胞群的物理和螢光特性，對其進行定性和/或分選。它可被視為單細胞分析的一種形式，因為流式細胞計法非常適合需要同時獲得大量細胞的單細胞層級定量資訊的實驗。

流式細胞計的一些優點包括快速分析、在檢視異質細胞群時喚起對細胞亞群差異的注意，以及分析異質細胞群的亞群。流式細胞計法常用於免疫分型和免疫腫瘤學研究應用，以分析血液、骨髓和其他樣本類型的血液學差異。

工作原理

流式細胞計的工作原理是依靠流體動力聚焦細胞懸浮樣品，形成單細胞流，並在雷射前通過。細胞如何散射入射光線，將被用來以每秒數千顆的速度判斷細胞的大小和細胞內的複雜性。

透過流式細胞計測量，可以定義特定的細胞群和這些細胞中的子群，並透過細胞分選進行物理分離，在此過程中，會根據螢光特性來操控細胞電荷，使粒子發生靜電偏轉。若要更精確地識別亞群，則需要使用探針。如果能成功解離固著細胞和固體組織，使其形成單細胞懸浮液，也可以使用此技術進行分析。

圖 1. 典型流式細胞分析示意圖。

傳統流式細胞儀的元件

對於流式細胞分析，即使是基本的單雷射流式細胞儀，至少也通常配備足夠的濾光片，以允許同時偵測四種螢光團。而且，目前在單一實驗中可分辨多達 18 種波長的光。傳統流式細胞儀的元件包括：

樣品處理與細胞分類的流體技術

• 流動室：

用於螢光檢測的光學

• 光在鏡子和濾光片系統中移動。
• 可根據細胞的大小、內部複雜度和訊號強度來量測細胞。

用於訊號處理、電腦顯示和分析的電子學

• 光電倍增管將光轉換為電子訊號。
• 訊號被放大並數位化。

流式細胞計法的免疫檢測

與其他免疫檢測應用一樣，有幾種方法可利用抗體以流式細胞計法探測特定的細胞分子。

直接檢測

直接檢測指的是單步染色過程，它使用特異性結合到感興趣的表位的一抗，並直接與允許可視化或其他檢測結合事件的分子結合。當探測定位在細胞表面的抗原時，不建議固定細胞，因為此過程會使抗體探針無法接觸到感興趣的抗原。因此，在資料擷取完成之前，保持未固定細胞的活力是很重要的。 要尋找直接檢測的抗體，Secondary Antibodies頁面的產品表搜尋，並篩選技術為 」流式細胞儀"。

透過我們在上的指南，了解更多關於在流式細胞計中檢測螢光色素的資訊。為您的流式細胞計量實驗選擇正確的螢光顏色，以及建立多色分析的最佳面板。

圖 2. 流式細胞計的直接檢測與間接檢測方法。

主要流式細胞計量規程步驟

流式細胞計量規程的四個主要步驟是：  

• 樣品準備：單細胞懸浮液應通過使用機械解離方法和分離技術（如使用酶溶液或鈣螯合試劑）進行預處理。
• 阻斷：抗 Fc 抗體稀釋通常應用於懸浮細胞，以防止一抗的非特異性結合。
• 抗體孵育：流式細胞計法孵育可涉及各種成分，如一抗、二抗、鏈球蛋白和螢光染料。
• 資料擷取：大多數的流式細胞儀都附有必要的軟體，可擷取並轉換細胞特徵訊號。然後，使用者可針對其實驗設定特定的軟體參數。

在我們的流式細胞計步驟中的關鍵步驟文章<, 中發現這些步驟的更多細節。/a>, or explore troubleshooting tips in our
Flow Cytometry Troubleshooting Guide。

適當的對照

除了感興趣的細胞之外，每個流式細胞計實驗都應該包含下列對照：

• 至少一個未染色的樣本，該樣本與測試樣本同時在每個步驟中用緩衝液孵育，以優化實驗中的流速和電壓。
• 一個適當的陰性對照樣本，除了用與一抗在相同宿主物種中培養的同型對照代替一抗外，陰性對照樣本將與測試樣本相同。要查找同型对照，请浏览我们的 流式细胞仪抗体页面上的表格。
• 在可能的情況下，陽性對照是由已知能表達每種相關抗原的細胞組成，與測試樣本共同培養，並僅用單一顏色進行測試。