漆酶(EC 1.10.3.2)是一種銅酵素,可氧化各種類型的酚類和類似芳香化合物芳香胺,並將分子氧還原為水,因此被用作生物催化劑。測定漆酶活性的分光光度法是基於酵素反應和不可避免的後續化學反應所形成的產物。目標
標準化酶法檢測漆酶活性的程序
2. 範圍
本程序的範圍是所有具有漆酶活性規格的產品
3.定義
以Syringaldazine為底物,在 pH 6.5、30 °C、3 mL反應容量下,一個單位每分鐘產生的DA530nm為0.001
4。討論
Syringaldazine + O2 ;Laccase > Oxidized Syringaldazine + 2H2O.
5.責任
分析服務人員有責任遵守本規程的書面規定。
6.安全
請參閱安全資料表 (SDS),瞭解危害和適當的處理預防措施。Procedure
7.1 CONDITIONS:
T = 30 °C, pH = 6.5, A530nm, Light path = 1 cm
7.2 METHOD:
Continuous Spectrophotometric Rate Determination
7.3 REAGENTS:
7.3.1 100 mM 磷酸鉀緩衝液,pH 6.5 at 30 °C (Buffer)
(Prepare 100 mL in deionized water using Potassium Phosphate, Monobasic, Anhydrous, Product Number P-5379.在 30 °C 下用 1 M KOH 調整至 pH 6.5。)
7.3.2 0.216 mM 丁香醛嗪溶液 (SYR)
(使用 Syringaldazine, 產品編號 S7896. 在絕對甲醇中製備 3 mL)
7.3.3 Laccase Enzyme Solution (Laccase)
(使用前,立即用去離子冷水配製含 25-50 單位/毫升 Laccase 的溶液。)
7.4 測試方法
將下列試劑移入適當的小瓶中(以毫升為單位):
平衡至 30 °C,使用適當恆溫的分光光度計監測 A530nm,直到恒定為止。
反轉混合並記錄 A530nm 的增加約 10 分鐘。使用測試品和空白品的最大線性速率獲得 DA530nm/min。
df = 稀釋因子
0.001 = 在 pH 6.5、30oC 下,3 mL 反應混合物中每單位漆酶的 A530nm/min.
7.6 最終分析濃度:
在 3.00 mL 的反應混合物中,最終濃度為 73 mM 磷酸鉀、0.02 mM 丁香醛嗪、10% 甲醇和 12.5 至 25.0 單位漆酶。批准
參考資料
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