HL-1 細胞

注意事項

處理或補充本培養基時，請使用無菌技術。本產品供研究或進一步製造使用。

儲存

請將培養基避光儲存於 2 至 8 °C。

劣化跡象

培養基應該是透明的，沒有顆粒和絮狀物質。如果培養基混濁或含有沉澱物，請勿使用。其他劣化跡象可能包括顏色改變、pH 值改變或物理或性能特性降級。

表一補充 Claycomb 媒介

產品名稱	mL	最終濃度
Claycomb Medium	87
胎牛血清	10	10%<
青黴素/鏈黴素	1	100 U/mL：100 µg/mL
去甲腎上腺素 (10 mM stock)	1	0.1 mM
L-Glutamine (200 mM stock)	1	2 mM

• 將 Claycomb Medium 瓶子包在鋁箔中，因為這種培養基對光線極為敏感。
• 補充的 Claycomb Medium 可使用兩週，此時會補充 L-谷氨酰胺。

Norepinephrine [(±)-arterenol], mw 319.3

• 去甲腎上腺素以 30 mM 抗壞血酸製成。
• 將 0.59 g 抗壞血酸加入 100 mL 细胞培養級蒸餾水中，製成 100 mL 30 mM 抗壞血酸。
• 在 25 mL 30 mM 抗壞血酸中加入 80 mg 去甲腎上腺素。
• 使用 0.2 µm Acrodisc 注射器過濾器過濾消毒。
• 以 1 mL 的容量分液到帶螺旋蓋的無菌微管中，並儲存於 -20 °C。這是 10 mM（儲備液）去甲腎上腺素。每 100 mL 培養基使用 1 mL 原液，以獲得 0.1 mM 的最終濃度。
• 去甲腎上腺素需要每月新配。

冷凍培養基

• 冷凍培養基由 95% FBS/5% DMSO 組成。

大豆胰蛋白酶抑制劑

• 稱取 25 mg 大豆胰蛋白酶抑制劑，放入含有 100 mL Dulbecco 磷鹽水溶液 (PBS; 不含 Ca2+ 和 Mg2+)的燒杯中直到溶解。
• 使用 0.2 µm 注射器過濾器過濾消毒，放入 100 mL 瓶中。
• 此產品在 4 °C 下可保存一個月。

預包被 Flasks

明膠/纖維連接素

• 稱取 0.1 g 明膠，放入 500 mL 玻璃瓶中。
• 加入蒸餾水至 500 mL 刻度，然後高壓滅菌。在高壓滅菌時，明膠會變成溶液。明膠的濃度為 0.02%。
• 纖維連接素（1 mg/mL）以液體狀收到試管中。將 1 mL 纖維連接素稀釋於 199 mL 0.02% 明膠中。輕輕混和，並立即等分 6 mL 至每個標示的 15 mL 離心管中。
• 在培養細胞前，用明膠/纖維連接素包覆組織培養瓶 (1 mL/T25 或 3 mL/T75 燒瓶)。
• 在向瓶中加入細胞前，用吸管吸去明膠/纖維連蛋白。

培養細胞

• 每週天用補充的 Claycomb Medium 餵養培養物 (5 mL/T25 瓶)。
• 為了避免在週末餵飼細胞，週五下午在每個 T25 燒瓶中加入 10 mL 補充的 Claycomb Medium；直到下週一早上才更換此培養基。

passaging--1:2分裂的程序

• 細胞第一次到達後，建議在它們達到融合度時進行分裂。
• 將每個 T25 燒瓶 1:2 拆分，得到四個 T25 燒瓶。
• 當剩下的三個 T25 燒瓶中的細胞在三天後達到融合度時，將它們以 1:3 的比例分割，得到三個需要冷凍的 T75 燒瓶。我們建議至少冷凍 3 個 T75 燒瓶。
• 因此，在收到 HL-1 細胞的一周內，您應該冷凍三個冷凍瓶的這些細胞，以備將來使用。
• 用 3 mL 加熱至 37 °C（T75 用 6 mL）的磷酸緩衝生理鹽水 (PBS) 短暫沖洗每個 T25 燒瓶，將 PBS 移液器移到燒瓶底部（瓶蓋對面），盡量不要直接碰到細胞。
• 每個 T25 燒瓶加入 1 mL 預先加熱的 0.05% 胰酶/EDTA（每個 T75 燒瓶加入 3 mL）。
• 移除並加入新的 0.05% 胰酶/EDTA。
• 在顯微鏡下檢查，如果細胞仍然附著，在台面上拍打燒瓶，使剩餘的細胞脫落。
• 為了使酶失活，加入等量（每 T25 1 mL）的大豆胰蛋白酶抑制劑。
• 將燒瓶中的細胞轉移到 15 mL 離心管中。
• 用 5 mL 洗滌培養基（僅含 5% FBS 和青黴素/鏈黴素的 Claycomb 培養基）沖洗空瓶，並加入已在 15 mL 離心管中的細胞。
• 以 500×g 離心 5 分鐘。
• 同時，移除每個 T25 燒瓶中的明膠/纖維連蛋白溶液，並加入 4 mL 補充的 Claycomb Medium/燒瓶。
• 從離心機中取出含有 HL-心肌細胞的試管。
• 將 1 mL 的細胞懸浮液轉移到兩個標有明膠/纖維蛋白塗層的 T25 燒瓶中。
• 如果在星期五傳代細胞，則每瓶使用 2 倍量的補充 Claycomb Medium。

冷凍

產品名稱	外部廠商	目錄編號.
HL-1 心肌細胞株	否	SCC065
Claycomb培養基	無	51800C
胎牛血清	否	TMS-016
胎牛血清	Penicillion-Streptomycin (104 U/mL P and 104 µg/mL S)	否	P4333
否	A0937
L-抗壞血酸，鈉鹽	無	A7506
L-Glutamine, 200 mM	無	G7513
Trypsin-EDTA (0.05%Trypsin in 0.02% EDTA-Na)	否	T3924
否	T6522
無	D8537
Fibronectin (1 mg/mL)	否	F1141
牛皮明膠**	無	G9391
蒸餾水，細胞培養級	否	W3500
2 mL 圓底冷凍瓶	Yes, Corning.	是，康寧	430289
無菌注射器過濾器，0.2µm	是，Gelman Sciences	4192
是, Nalgene	7-5100-0001

1. Claycomb WC, Lanson NA, Stallworth BS, Egeland DB, Delcarpio JB, Bahinski A, Izzo NJ. 1998. HL-1 cells: A cardiac muscle cell line that contracts and retains phenotypic characteristics of the adult cardiomyocyte. Proceedings of the National Academy of Sciences. 95(6):2979-2984. https://doi.org/10.1073/pnas.95.6.2979