Pierwotne ludzkie fibroblasty i pożywki wzrostowe

Produkty te są dostępne w Stanach Zjednoczonych, Kanadzie i wybranych krajach europejskich.

• Pierwotny system hodowli ludzkich fibroblastów
• Kontrola jakości pierwotnych ludzkich fibroblastów i pożywek
• Pierwotne ludzkie komórki fibroblastów
• Podłoże do wzrostu fibroblastów
• Podłoże do hodowli fibroblastów 2
• Podłoże do hodowli fibroblastów 3
• Materiały do hodowli pierwotnych ludzkich fibroblastów.

Pierwotny system hodowli ludzkich fibroblastów

Tkanka łączna pochodzi z mezodermy i ma kluczowe znaczenie dla utrzymania integralności strukturalnej organizmu. Fibroblasty, dominujące komórki występujące w tkance łącznej, stale wydzielają różne składniki macierzy zewnątrzkomórkowej. Fibroblasty wykazują unikalną morfologię i właściwości funkcjonalne, które zależą od miejsca ich pochodzenia i stanu fizjologicznego.

Pierwotne ludzkie fibroblasty od PromoCell są izolowane z normalnego ludzkiego młodocianego napletka lub z dorosłej skóry z różnych miejsc, w tym z tkanki płucnej dorosłego człowieka oraz z tkanki aorty. Wkrótce po izolacji, ludzkie fibroblasty są kriokonserwowane przy przejściu 2 (P2) przy użyciu opatentowanej, wolnej od surowicy pożywki do zamrażania, Cryo-SFM. Każda rozmrożona kriofiolka zawiera co najmniej 500 000 żywych komórek. Fibroblasty ludzkie są również dostępne jako proliferujące kultury komórkowe wykonane z kriokonserwowanych komórek, które zostały rozmrożone i hodowane przez trzy dni.

• Protokół hodowli pierwotnych ludzkich fibroblastów

Podłoże do hodowli fibroblastów jest dostępne w trzech różnych formułach:

• Podłoże do wzrostu fibroblastów to podłoże do wzrostu fibroblastów.bez surowicy pożywka opracowana do hodowli in vitro fibroblastów. Pożywka ta jest zoptymalizowana dla pierwotnych komórek ludzkich, ale może być również stosowana do fibroblastów bydlęcych, świńskich i szczurzych, a także linii komórkowych fibroblastów.
• Fibroblast Growth Medium 2 to pożywka o niskiej zawartości surowicy .pożywka o niskiej zawartości surowicy opracowana do hodowli in vitro dorosłych ludzkich fibroblastów. Pożywka jest zoptymalizowana dla pierwotnych komórek ludzkich, ale może być również stosowana do fibroblastów bydlęcych, świńskich i szczurzych, a także linii komórkowych fibroblastów.
• Podłoże do wzrostu fibroblastów 3 zostało opracowane specjalnie do&in vitro hodowli dorosłych ludzkich fibroblastów sercowych (HCF).

Wszystkie preparaty Fibroblast Growth Media są dostępne w dwóch opcjach: Medium (gotowe do użycia) i Medium Kit. Opcja Medium (gotowa do użycia) obejmuje 500 ml butelkę Basal Medium i jedną fiolkę SupplementMix. Zestaw Medium Kit zawiera 500 ml butelkę Basal Medium i SupplementPack, który jest zestawem pojedynczych fiolek ze wstępnie odmierzonymi suplementami, dając użytkownikowi pełną kontrolę nad formułą pożywki. Dodanie SupplementMix lub SupplementPack do Basal Medium generuje kompletne podłoże do wzrostu fibroblastów. Fibroblast Basal Medium (z czerwienią fenolową lub bez), SupplementMix i SupplementPack można również nabyć oddzielnie.

Zalecane formuły pożywek dla określonych typów komórek pierwotnych fibroblastów

Podłoże do wzrostu fibroblastów	Podłoże do wzrostu fibroblastów 2	Podłoże do wzrostu fibroblastów 3
Normalne ludzkie fibroblasty skórne (NHDF), młodzieńczy napletek	Normalne ludzkie fibroblasty skórne (NHDF), dorosły dawca Ludzkie fibroblasty płucne (HPF) Human Aortic Adventitial Fibroblasts (HAoAF) Ludzkie fibroblasty macicy (HUF)	Human Cardiac Fibroblasts (HCF)

Szczegóły suplementacji podłoża do hodowli fibroblastów

Podłoże do hodowli fibroblastów zawiera wszystkie składniki niezbędne do optymalnego wzrostu ludzkich fibroblastów (szczegóły w tabeli poniżej). Fibroblast Growth Media nie zawiera antybiotyków ani środków przeciwgrzybiczych i jest przeznaczony do stosowania w inkubatorze z 5% atmosferycznym CO₂.

Końcowe stężenia suplementów Fibroblast Growth Media
(po dodaniu do pożywki)

Składnik	Podłoże do wzrostu fibroblastów	Podłoże do wzrostu fibroblastów 2	Podłoże do wzrostu fibroblastów 3<
Fetal Calf Serum	-	0.02 mL / mL	0.1 mL / mL
Podstawowy czynnik wzrostu fibroblastów (rekombinowany ludzki)	1 ng / mL	1 ng / mL	1 ng / mL
Insulina (rekombinowana ludzka)	5 μg / mL	5 μg / mL	5 μg / mL

Przygotowanie pożywki uzupełniającej dla ludzkich fibroblastów

• Odmroź Fibroblast Growth Media SupplementMix lub SupplementPack w temperaturze 15 - 25 °C.
• Aseptycznie wymieszaj roztwory suplementów poprzez delikatne pipetowanie w górę i w dół.
• Przenieś całą zawartość każdego suplementu do Fibroblast Basal Medium.
• Zamknąć butelkę i delikatnie zawirować, aby uzyskać jednorodną mieszaninę.

Przechowywanie i stabilność pierwotnych ludzkich fibroblastów i pożywki wzrostowej

• Po dostarczeniu natychmiast przechowywać pożywkę podstawową dla fibroblastów w ciemności w temperaturze 4-8 °C; nie zamrażać. Przechowuj Fibroblast Growth Medium SupplementMix lub SupplementPack w temperaturze -20 °C.
• Przy prawidłowym przechowywaniu produkty są stabilne do daty ważności podanej na etykiecie.
• Po dodaniu suplementów do Fibroblast Basal Medium, okres przechowywania kompletnej pożywki wynosi sześć tygodni w temperaturze 4 - 8 °C. Nie zamrażać kompletnej pożywki do wzrostu fibroblastów.
• W celu użycia podgrzej tylko wymaganą porcję kompletnej pożywki do wzrostu fibroblastów i przechowuj pozostałą pożywkę w lodówce w temperaturze 4-8 °C.
• Po otrzymaniu przechowuj kriokonserwowane komórki w ciekłym azocie lub posiać bezpośrednio.
• Proliferujące komórki muszą być przetworzone natychmiast.

Quality Control for Primary Human Fibroblasts and Growth Media

.Kontrola jakości ludzkich fibroblastów

Następujące sztywne testy kontroli jakości są przeprowadzane na każdej partii ludzkich fibroblastów:

• Testowanie morfologii komórek, wskaźnika przylegania i żywotności komórek
• Analizy cytometrii przepływowej antygenu CD90 specyficznego dla fibroblastów
• Testowanie wydajności wzrostu poprzez wielokrotne przejścia do 10 lub 15 podwojeń populacji (PD) w warunkach hodowli bez antybiotyków i środków przeciwgrzybiczych (patrz tabela poniżej).
• Testowanie na nieobecność HIV-1, HIV-2, HBV, HCV, HTLV-1, HTLV-2 i zanieczyszczeń mikrobiologicznych (grzybów, bakterii i mykoplazmy)
• Szczegółowy certyfikat analizy (CoA) dla każdej partii jest dostępny do pobrania.

Specyfikacja ludzkich komórek fibroblastów

Produkt	Zalecane podłoże hodowlane*	Gęstość płytek	Przechodzenie po rozmrożeniu	Marker	Podwojenie populacji
Normalne ludzkie fibroblasty skórne (NHDF), młodzieńczy napletek	C-23010	3,500 - 7,000 komórek na cm²	P2	CD90+	> 15
Normalne ludzkie fibroblasty skórne (NHDF), dorosły dawca	C-23020	3 500 - 7 000 komórek na cm²	P2	CD90+	> 15
Ludzkie fibroblasty płucne (HPF)	C-23020	3,500 - 7,000 komórek na cm²	P2	CD90+	> 15
Human Aortic Adventitial Fibroblasts (HAoAF)	C-23020	3,500 - 7,000 komórek na cm²	P2	CD90+	> 10
Human Cardiac Fibroblasts (HCF)	C-23025	3 500 - 7 000 komórek na cm²	P2	CD90+ α-aktyna mięśni gładkich Miozyna mięśni wolnych	> 15
Human Uterine Fibroblasts (HUF)	C-23020	3,500 - 7,000 komórek na cm²	P2	CD90+	> 15

*numery katalogów w tej tabeli dotyczą pożywek w opakowaniach gotowych do użycia

Kontrola jakości pożywek do wzrostu fibroblastów

Wszystkie partie pożywek do wzrostu fibroblastów są poddawane kompleksowym testom kontroli jakości. Testy te sprawdzają aktywność stymulującą wzrost, szybkość przylegania i typową morfologię pierwotnych ludzkich fibroblastów. Zatwierdzone wewnętrzne partie pożywek są wykorzystywane jako odniesienie. Dodatkowo, testy mikrobiologiczne zapewniają, że wszystkie partie pożywek do wzrostu fibroblastów są wolne od zanieczyszczeń (grzybów, bakterii, mykoplazmy).

Przeznaczenie pierwotnych ludzkich fibroblastów i podłoża hodowlanego

.Pierwotne ludzkie fibroblasty i podłoża hodowlane są przeznaczone wyłącznie do użytku in vitro , a nie do procedur diagnostycznych lub terapeutycznych. W celu uzyskania informacji dotyczących bezpieczeństwa należy zapoznać się z odpowiednią kartą charakterystyki.

Uwaga: Pożywki PromoCell mają niską lub zerową zawartość surowicy i nie nadają się do neutralizacji trypsyny (na przykład podczas subkulturowania komórek). Zamiast tego zalecamy użycie zestawu DetachKit (C-41200, C-41210, C-41220), który zawiera HEPES BSS, Trypsin/EDTA i Trypsin Neutralizing Solution.

Materiały do hodowli pierwotnych ludzkich fibroblastów