Technologia fosfolipidowa HybridSPE®
Skuteczne usuwanie fosfolipidów i białek dla dokładnej i powtarzalnej analizy LC-MS
Przegląd sekcji
Płytki HybridSPE®-PLus - następna generacja technologii HybridSPE®-Phospholipid
Nasze nowe płytki HybridSPE®-PLus oferują te same sprawdzone właściwości chemiczne, co tradycyjne płytki HybridSPE®-Phospholipid.sup>®-PLus oferują ten sam sprawdzony skład chemiczny naszych tradycyjnych płytek HybridSPE®-Phospholipid w połączeniu z ulepszeniami produkcji płytek, które wynikają z wieloletniego doświadczenia produkcyjnego. Te ulepszenia produkcyjne pozwoliły nam zwiększyć spójność przepływu między dołkami i zmniejszyć objętość zatrzymywanych próbek, jeszcze bardziej poprawiając odzyskiwanie analitów i powtarzalność testów. Będziemy nadal oferować i wspierać nasze tradycyjne płytki HybridSPE®-Phospholipid z kwadratowymi dołkami dla tych klientów, którzy opracowali na nich metody, ale zapraszamy tych klientów, którzy opracowują nowe metody, do skorzystania z najnowszej technologii: HybridSPE®-PLus.
Wpływ fosfolipidów na dokładność i odtwarzalność danych LC-MS
Fosfolipidy: Problem analizy LC-MS małych cząsteczek w matrycach biologicznych
Fosfolipidy są głównym składnikiem wszystkich błon komórkowych. Są one zatem obecne we wszystkich matrycach próbek biologicznych, w tym w surowicy, osoczu i krwi pełnej, i mogą stanowić problem w analizie LC-MS małych cząsteczek, ponieważ często ulegają koelucji i jonizacji wraz z analitami będącymi przedmiotem zainteresowania. Ta ko-elucja powoduje tłumienie jonów (błędny spadek) sygnału specyfikacji masy, co może powodować zmienność i wpływać na dokładność wyników LC-MS (Rysunek 1).
Rysunek 1. Wpływ fosfolipidów na jonizację klonidyny
Ważność dokładnych wyników i szybkich odpowiedzi w bioanalizie
Zrozumieliśmy, że wyniki analiz mogą mieć znaczący wpływ na życie wielu innych osób. Wywiera to presję na zapewnienie jak największej dokładności uzyskiwanych danych. Potrzebujesz nie tylko szybkich odpowiedzi, ale także odpowiedzi, którym możesz zaufać. Złożoność rodzajów próbek, z którymi pracujesz, nie ułatwia ci pracy. Białka i fosfolipidy obecne w różnym stopniu w próbkach mogą zwiększać zmienność wyników analitycznych podczas korzystania z czułych technik, takich jak LC-MS lub LC-MS/MS. Mamy ponad cztery dekady doświadczenia w chromatografii, aby pomóc Ci poruszać się po złożoności opcji przygotowania próbek.
Ograniczenia tradycyjnych metod przygotowywania próbek biologicznych
Większość badaczy klinicznych i biologicznych stosuje tradycyjne metody, takie jak wytrącanie białek i ekstrakcja ciecz-ciecz.Ograniczenia tradycyjnych metod oczyszczania próbek biologicznych
Większość badaczy klinicznych i biologicznych stosuje tradycyjne metody, takie jak wytrącanie białek i ekstrakcja ciecz-ciecz w celu oczyszczenia próbek przed analizą. Chociaż techniki te pozwalają na niedrogie i szybkie usuwanie białek, całkowicie nie rozwiązują problemu tłumienia jonów wywołanego przez fosfolipidy.
Nawet jeśli fosfolipidy nie koeluują z interesującym analitem, mogą gromadzić się na kolumnie analitycznej i sporadycznie eluować z kolumny w dalszych analizach. Może to powodować nieprzewidywalne tłumienie jonów i słabą odtwarzalność, a tym samym zagrażać dokładności wyników (Rysunek 2).
Zakłócenia tła obserwowane po wielokrotnych wstrzyknięciach przy użyciu Std. Protein PPT
Rysunek 2. Gradient RP LC-MS pustych próbek osocza przygotowanych przy użyciu standardowego białka PPT vs. HybridSPE®-Phospholipid
Zakłócenia tła zaobserwowane po wielokrotnych iniekcjach przy użyciu technologii fosfolipidowej HybridSPE®
Ciśnienie wsteczne generowane w kolumnie C18 1,8 µm (5 cm x 2,1 mm) po wielokrotnym wstrzyknięciu
Techniki usuwania fosfolipidów
Aby przezwyciężyć problem tłumienia jonów przez fosfolipidy, niektórzy analitycy próbują tradycyjnej SPE. Tradycyjna SPE często wymaga czasochłonnego i złożonego opracowania metody, ale nadal usuwa tylko nominalne ilości fosfolipidów. Pozostałe fosfolipidy mogą wpływać na dokładność wyników, gromadzić się na kolumnie analitycznej i wpływać na przyszłe analizy, zwiększać koszty wymiany kolumny i wydłużać czas przestoju urządzenia.
Obecnie na rynku dostępnych jest wiele produktów zaprojektowanych specjalnie do usuwania zarówno białek, jak i fosfolipidów, w tym HybridSPE® płytki i wkłady. Większość z tych produktów jest prosta, szybka i łatwa w użyciu, oferując dość znormalizowane metody przy minimalnym rozwoju metody. Większość z nich wykorzystuje jednak hydrofobowy mechanizm retencji do oddzielania fosfolipidów od interesujących analitów w próbce. Stanowi to problem, jeśli interesujące anality są również hydrofobowe, ponieważ zostaną one zatrzymane i usunięte wraz z hydrofobowymi fosfolipidami. Skutkuje to zmniejszonym odzyskiem analitu i niedokładnymi wynikami. Technologia HybridSPE®Phospholipid różni się tym, że całkowicie usuwa zarówno białka, jak i fosfolipidy z próbki bez zatrzymywania innych związków hydrofobowych.
Unikalny skład chemiczny i podstawowa metodologia HybridSPE®-Phospolipid Technology<
Czym różni się technologia HybridSPE®-Phospholipid Technology od innych produktów do usuwania fosfolipidów?
Pierwsza w swoim rodzaju technologia HybridSPE®-Phospholipid została wprowadzona w 2008 roku. Łączy ona prostą, znormalizowaną metodologię tradycyjnego wytrącania białek ze specyficznością ekstrakcji do fazy stałej (SPE) w celu jednoczesnego usuwania białek i fosfolipidów z próbek biologicznych przed analizą LC-MS. W przeciwieństwie do innych produktów do usuwania fosfolipidów, które wykorzystują hydrofobowy mechanizm retencji do usuwania fosfolipidów z próbek biologicznych, technologia HybridSPE®-Phospholipid wykorzystuje unikalny mechanizm retencji (Rysunek 3). Pozwala to na oddzielenie fosfolipidów od nawet bardzo hydrofobowych analitów, takich jak witaminy, które są często zatrzymywane wraz z fosfolipidami w konkurencyjnych produktach.
Rysunek 3. Unikalny mechanizm retencji technologii HybridSPE®-Phospholipid umożliwia oddzielanie nawet bardzo hydrofobowych analitów od zanieczyszczeń fosfolipidowych w matrycach próbek biologicznych.
Nowsza, lepsza metoda przygotowania próbki do usuwania fosfolipidów
Laboratoria pracujące z próbkami biologicznymi często decydują się na wytrącanie białek przed analizą LC-MS, stosując ją jako metodę przygotowania próbki. Uważają, że usuwanie fosfolipidów jest bardziej kosztowne, czasochłonne i niepotrzebne, jeśli konkretne anality będące przedmiotem zainteresowania nie ulegają koelucji z fosfolipidami w próbce. Laboratoria mogą faktycznie obniżyć ogólne koszty i zwiększyć ogólną przepustowość, generując jednocześnie dokładniejsze dane dzięki zastosowaniu technologii HybridSPE®-Phospholipid do usuwania zarówno białek, jak i fosfolipidów ze wszystkich próbek biologicznych przed analizą LC-MS małych cząsteczek.
Proste i szybkie usuwanie fosfolipidów
Protokół 96-dołkowej płytki obejmuje tylko kilka prostych kroków (Rysunki 4 i 5), a płytki mogą być używane bezpośrednio po wyjęciu z opakowania bez konieczności wstępnego kondycjonowania. Próbka (w razie potrzeby zawierająca wzorce wewnętrzne) i rozpuszczalnik strącający są najpierw dodawane do płytki, po czym następuje etap mieszania i zastosowanie próżni w celu zebrania próbki. Zebrane próbki są następnie gotowe do analizy.
Rysunek 4. Przedstawienie podstawowego procesu przygotowania próbki HybridSPE®-Phospholipid
1. Dodaj próbkę Nanieś pipetą 100 µL osocza lub surowicy na płytkę HybridSPE®, a następnie 300 µL rozpuszczalnika strącającego. W razie potrzeby dodać wzorce wewnętrzne. | 2. Mieszać worteksując/wstrząsając płytką HybridSPE® lub zasysając/dozując za pomocą końcówki pipety 0,5-1 ml. | 3. Zastosować próżnię Zespół filtra/fryty z upakowanym złożem działa jakofiltr wgłębny do jednoczesnego fizycznego usuwania wytrąconych białek i chemicznego usuwania fosfolipidów. Małe cząsteczki (np, związki farmaceutyczne i metabolity) przechodzą niezatrzymane. | 4. Pobierz próbkę Otrzymany filtrat/eluat jest wolny od białek i fosfolipidów i gotowy do natychmiastowej analizy LC-MS/MS. |
Rysunek 5. Protokół HybridSPE® dla płytek 96-dołkowych
Powiązane zasoby
- Data Sheet: Instructions for HybridSPE®-PLus 96-Well Plates
Phospholipids cause ion suppression in LC-MS analyses and can accumulate on columns, affecting accuracy and increasing costs. HybridSPE-Phospholipid technology effectively removes these interferences, improving the reliability of LC-MS results.
- Data Sheet: Instructions & Troubleshooting for HybridSPE®-Phospholipid Ultra Cartridge
The HybridSPE®-Phospholipid Ultra Cartridge cleans biological samples for LC-MS-MS by removing small particles, proteins, and phospholipids that cause ion suppression, utilizing a selective interaction between zirconia ions and phospholipids.
- Webinar: Meeting the LC-MS Needs of a High-Throughput Clinical Lab
The rise of LC-MS/MS in clinical laboratories has created challenges for service providers and vendors due to differing workflows and analytes. This presentation will discuss alternative sample extraction and chromatography solutions for endocrinology and biochemical genetics in hospital settings.
- Product Information: HybridSPE®-Precipitation Technology
In pharmaceutical bioanalysis, phospholipid contamination causes ion suppression during drug quantification in biological fluids, impacting signal detection and leading to uncontrolled elution in LC runs. HybridSPE-Precipitation provides a simple solution to remove these interferences.
- Article: Enrichment of Phospholipids in Biological Samples Using HybridSPE®
A simple method to enrich phospholipids from plasma samples, involving a HybridSPE-PPT 96-well plate that both retains phospholipids and removes precipitated proteins.
- PDF: High Recovery Method of HybridSPE®-Phospholipid for Cleanup of Biological Samples Prior to LC-MS Analysis
The method includes in-well protein precipitation using organic solvents like acetonitrile and methanol, along with phospholipid removal using proprietary zirconia-modified silica particles. This process is both simple and fast.
- PDF: High Throughput Bioanalysis Utilizing Fused-Core™ Particle and HybridSPE®-PPT Technology (HPLC 2010)
The trend in high-throughput bioanalysis favors faster chromatographic separations with minimal sample preparation, which can compromise data quality. This presentation highlights recent advancements in chromatographic media and sample preparation techniques that enhance throughput while improving data quality and simplifying methods.
- PDF: Alternative Method of Hybrid SPE Sample Preparation for High Recovery LC-MS Analysis of Pharmaceutical Compounds in Plasma
This sample cleanup method efficiently removes proteins and phospholipids using organic solvents for protein precipitation and proprietary zirconia particles for phospholipid removal. It is simple, fast, and suitable for high-throughput applications.
- PDF: Comparison of Sample Preparation Techniques for Reduction of Matrix Interference in Biological Analysis by LC-MS-MS
Matrix effects in biological samples can cause variability in LC-MS due to co-elution of phospholipids with analytes. This study evaluates three sample preparation techniques for effective phospholipid removal, optimizing the HybridSPE method while using generic SPE and PPT methods without modification.
- PDF: Depletion of Phospholipid Matrix Interference when Dealing with Small Volume Plasma Samples
Sample preparation of small plasma volumes (e.g., 30 µL from mice) is challenging due to large hold-up volumes in solid phase extraction and increased matrix interference from liquid-liquid protein precipitation. This affects analyte quantitation and requires time-consuming gradient elution to mitigate matrix effects.
- PDF: High Throughput Removal of Both Phospholipids and Proteins in Bioanalytical Sample Preparation
Sample preparation is vital in pharmaceutical bioanalysis due to complex matrices. Techniques like protein precipitation and solid phase extraction (SPE) are used, with SPE being selective but time-consuming. Protein precipitation removes only proteins, leaving phospholipids that can cause ion suppression and affect results.
- PDF: Impact of Ion-Suppression Due to the Presence of Phospholipids on the Enantiomeric LC-MS Analysis of Clenbuterol
This study shows the impact of ion suppression on enantiomeric separation with standard protein precipitation (PPT) and correlates it with analyte concentration. It also highlights the HybridSPE-PPT protocol for phospholipid removal using clenbuterol's racemic mixture.
- PDF: Increased Bioanalytical Throughput Utilizing Fused-Core™ Particles with Selective Phospholipid Depletion
The HybridSPE™ platform improves chromatographic speed and throughput by selectively depleting phospholipids. This study evaluates the HybridSPE Small Volume 96-well plate for 20-40 µL rat plasma samples, featuring a zirconia-coated silica phase and a 0.45 µm polishing filter.
- PDF: Recovery of Pharmaceutical Drugs From Small Volume Biological Sample Using HybridSPE®-PPT 96-well Plate
The HybridSPE-PPT method integrates protein precipitation and phospholipid removal to enhance sample preparation efficiency. It emphasizes optimizing elution volume and reproducibility, applicable in various bioanalytical contexts.
- PDF: Selective Depletion of Phospholipids Interference Utilizing HybridSPE™-Precipitation Technology
Biological sample analysis is hindered by interferences from preparation techniques. Protein precipitation can cause chromatographic irregularities due to co-extracted phospholipids, while solid phase extraction (SPE) offers better cleanup but increases time and complexity.
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?