Analiza LC/MS/MS enancjomerów kwasu DL-d-hydroksyglutarowego na Astec® CHIROBIOTIC® R
Materiały
Standardowe
kolumna analityczna
produkt powiązany
CONDITIONS
column
CHIROBIOTIC R, 25 cm x 4.6 mm I.D., 5 μm particles (13024AST)
mobile phase
(A) ethanol:methanol (3:1, v:v); (B) 0.1% v/v TEA in water, adjusted to pH 4.5 with acetic acid; 75:25 (A:B)
flow rate
0.4 mL/min
column temp.
20 °C
detector
MS, ESI(-), 100-1000 m/z
injection
5 μL
sample
each enantiomer, 100 μg/mL in water
Opis
Komentarz do analizy
Chiralne 2-hydroksyglutarany (2-OHG) są ważnymi sygnaturami molekularnymi zarówno zdrowych, jak i chorych komórek biologicznych, ich specyficznych szlaków biochemicznych i wrodzonych błędów metabolizmu. Chiralne rozróżnienie i kwantyfikacja D-2-OHG (R(-)-2-OHG) i L-2-OHG (S(+)-2-OHG) jest kluczem do scharakteryzowania zaburzeń neurometabolicznych, takich jak kwasica 2-hydroksyglutarowa, która powoduje upośledzenie neurologiczne we wczesnym okresie życia. Zdolność do rozróżniania i ilościowego oznaczania enancjomerów 2-OHG jest zatem ważna, aby móc śledzić jego rozmieszczenie w szlaku metabolicznym normalnych i zmutowanych komórek. Przedstawiamy tutaj szybką i czułą metodę oddzielania i pomiaru D-2-OHG i L-2-OHG przy użyciu detekcji LC-MS/MS. Kolumna Astec® CHIROBIOTIC R (selektor chiralny ristocetyny) została uruchomiona w warunkach polarnej jonowej fazy ruchomej. Zastosowanie tandemowego MS wyeliminowało dwa podstawowe wyzwania analityczne związane z tymi związkami: brak chromoforu pochłaniającego promieniowanie UV w cząsteczce 2-OHG oraz obfitość konkurencyjnych kwasów o niskiej masie cząsteczkowej w moczu. Górny panel chromatogramu przedstawia rozdział D-2-OHG i L-2-OHG uzyskany podczas opracowywania metody. Dolny panel przedstawia czysty kwas L-2-hydroksyglutarowy.
Oprócz zapewnienia niezbędnej enancjoselektywności, kolumny Astec® CHIROBIOTIC mają tę zaletę, że działają w wodnych i polarnych organicznych fazach ruchomych, które są odpowiednie dla polarnych leków i metabolitów. Ich interakcje jonowe sprzyjają jonizacji analitu, co zwiększa czułość detekcji ESI. Oprócz kolumn CHIROBIOTIC, Sigma-Aldrich dostarcza również czynniki fazy ruchomej o wysokiej czystości, racemiczne i czyste chiralne enancjomery 2-OHG oraz inne związki w szlaku dehydrogenazy izocytrynianowej (IDH).
Informacje prawne
Astec is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
CHIROBIOTIC is a registered trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC