Analiza LC/MS metabolitów glukuronidów opioidów w moczu na urządzeniu Ascentis® Express F5 po ekstrakcji do fazy stałej (SPE) przy użyciu Supel™-Select HLB
Materiały
Standardowe
Morphine-3-β-D-glucuronide solution
1 mg/mL in methanol with 0.05% NaOH, ampule of 1 mL, certified reference material, Cerilliant®Hydromorphone solution
1 mg/mL in methanol, ampule of 1 mL, certified reference material, Cerilliant®Buprenorphine glucuronide solution
100 μg/mL in methanol, ampule of 1 mL, certified reference material, Cerilliant®Buprenorphine solution
1.0 mg/mL in methanol, ampule of 1 mL, certified reference material, Cerilliant®Codeine solution
100 μg/mL in methanol, ampule of 1 mL, certified reference material, Cerilliant®Codeine-6-β-D-glucuronide solution
100 μg/mL in methanol: water (2:8), ampule of 1 mL, certified reference material, Cerilliant®Hydrocodone solution
1.0 mg/mL in methanol, ampule of 1 mL, certified reference material, Cerilliant®Hydromorphone-3-β-D-glucuronide
100 μg/mL in methanol: water (1:1), ampule of 1 mL, certified reference material, Cerilliant®Morphine solution
100 μg/mL in methanol, ampule of 1 mL, certified reference material, Cerilliant®Norbuprenorphine glucuronide solution
100 μg/mL in methanol, ampule of 1 mL, certified reference material, Cerilliant®Norbuprenorphine solution
1.0 mg/mL in methanol, ampule of 1 mL, certified reference material, Cerilliant®Oxycodone solution
1.0 mg/mL in methanol, ampule of 1 mL, certified reference material, Cerilliant®Oxymorphone-D3 solution
100 μg/mL in methanol, ampule of 1 mL, certified reference material, Cerilliant®Oxymorphone-3-β-D-glucuronide solution
100 μg/mL in methanol: water (1:1), ampule of 1 mL, certified reference material, Cerilliant®kolumna analityczna
probówka lub płytka SPE
CONDITIONS
sample preparation
Solid Phase Extraction
sample/matrix
urine spiked with drugs and metabolites at 300 ng/mL
SPE well plate
Supel-Select HLB 96-well plate, 60 mg/well (575662-U)
condition
1 mL methanol followed by 1 mL water
sample addition
1 mL hydrolyzed urine
washing
1 mL water followed by 1 mL 25% methanol
elution
1 mL acetonitrile
column
Ascentis Express F5, 10 cm x 2.1 mm I.D., 2.7 μm particles (53569-U)
mobile phase
[A] 5 mM ammonium formate, pH 4.2 (adjusted with formic acid); [B] 5 mM ammonium formate in (95:5 acetonitrile:water) pH 5.2 (adjusted with formic acid)
gradient
15% B held for 1 min, to 70% B in 2 min, held at 70% B for 7 min
flow rate
0.4 mL/min
column temp.
35 °C
detector
ESI(+) TOF, full scan, m/z 100-1000
injection
3 μL
sample
300 ng/mL
Opis
Komentarz do analizy
Poniżej przedstawiono przebieg analizy LC/MS natywnych leków i powiązanych metabolitów z moczu. Do hydrolizy metabolitów glukuronidów wykorzystano wygodną płynną formę beta-glukuronidazy firmy Sigma. SPE przy użyciu Supel-Select HLB dało czyste ekstrakty. Kolumienki Ascentis Express F5 zapewniły wysoce wydajne, dobrze rozdzielone piki i szybką separację. Rozpuszczalniki i dodatki LC-MS o ultra wysokiej czystości zapewniły bezproblemową pracę, a Cerilliant CRM zapewniły wiarygodną kwantyfikację.
Wstępna obróbka próbki: hydroliza β-glukuronidazy
Informacje prawne
Ascentis is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Supel is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC