NS1226

Sonda kwasu cysteinosulfenowego (DCP-Bio1)

• UNSPSC Code: 12352200
• NACRES: NA.25
• eCl@ss: 32160405

Właściwości

• Quality Level: 100

Opis

General description

Reszty cysteiny w niektórych białkach mogą być przejściowo utleniane do kwasu cysteinosulfenowego, a takie zdarzenia utleniania mogą wpływać na aktywność enzymatyczną, a tym samym regulować szlaki sygnałowe. Większość białek zawierających kwas cysteinosulfenowy robi to tylko wtedy, gdy komórka zawiera podwyższone poziomy reaktywnych form tlenu, chociaż niektóre białka, takie jak GAPDH, wydają się zawierać kwas cysteinosulfenowy w zwykłych warunkach.
Najczęściej stosowana metoda oceny, czy białka są zmodyfikowane tak, aby zawierały kwas cysteinosulfenowy, wykorzystuje derywatyzację 5,5-dimetylo-1,3-cykloheksanedionem (dimedonem), a następnie wykrywanie za pomocą przeciwciała przeciwko białkom zmodyfikowanym dimedonem. Opracowano jednak nowe odczynniki w celu uproszczenia analizy i izolacji białek zawierających kwas cysteinosulfenowy. DCP-Bio1, który składa się z reaktywnego kwasu sulfenowego 3-(2,4-dioksocykloheksylo) propylu (DCP) dołączonego do biotyny, jest użytecznym odczynnikiem do charakteryzowania komórkowego kwasu sulfenowego cysteiny.

Application

PROTOKÓŁ
Roztwory:
Roztwór podstawowy DCP-Bio1
Zawiesić całą zawartość fiolki w 10 µL DMSO do końcowego stężenia 250 mM.
Bufor do lizy
50 mM Tris-HCl, pH 7,5
100 mM chlorek sodu
0,1% SDS
0,5% dezoksycholan sodu
0,5% NP-40
0,5% Triton X-100
Roboczy bufor do lizy
W dniu testu uzupełnić podstawowy bufor do lizy o:
50 mM fluorek sodu
1 mM PMSF
1 mM DCP-Bio1
100 µM DTPA (kwas dietylenotriaminopentaoctowy)
10 mM N-etylomaleimidu
10 mM jodoacetamidu
200 U/ml katalazy
1x koktajl inhibitorów proteazy
Obróbka i liza komórek:
1) Posiać przylegające komórki w 100 mm płytkach do hodowli komórkowych lub innych płytkach zgodnie z życzeniem.
2) Zmień podłoże na świeże 30 minut przed wybranymi zabiegami.
3) Przepłukać wszystkie płytki 2 razy 10 ml 1x PBS.
4) Dodać 150 µL roboczego buforu lizującego do płytek i zeskrobać komórki.
5) Inkubować lizaty na lodzie przez 1-2 godziny.
6) Odwirować lizaty z prędkością 10 000 rpm przez 10 minut i zebrać supernatant.
7) Usunąć nieprzereagowane DCP-Bio1 i inne małe cząsteczki za pomocą kolumn Bio-Rad P6-Spin Columns (PN: 732-6227) zgodnie z instrukcjami producenta.
8) Zmierzyć stężenie białka.
9) Przeprowadzić analizę biochemiczną.

Roztwory:
Roztwór podstawowy DCP-Bio1
Zawiesić całą zawartość fiolki w 10 µL DMSO do końcowego stężenia 250 mM.
Zapasowy bufor do lizy
50 mM Tris-HCl, pH 7,5
100 mM chlorek sodu
0,1% SDS
0,5% dezoksycholan sodu
0,5% NP-40
0,5% Triton X-100
Roboczy bufor do lizy
W dniu testu uzupełnić podstawowy bufor do lizy o:
50 mM fluorek sodu
1 mM PMSF
1 mM DCP-Bio1
100 µM DTPA (kwas dietylenotriaminopentaoctowy)
10 mM N-etylomaleimidu
10 mM jodoacetamidu
200 U/ml katalazy
1x koktajl inhibitorów proteazy
Obróbka i liza komórek:
1) Posiać przylegające komórki w 100 mm naczyniach do hodowli komórkowych lub innych płytkach zgodnie z życzeniem.
2) Zmień podłoże na świeże 30 minut przed wybranymi zabiegami.
3) Przepłukać wszystkie płytki 2 razy 10 ml 1x PBS.
4) Dodać 150 µL roboczego buforu lizującego do płytek i zeskrobać komórki.
5) Inkubować lizaty na lodzie przez 1-2 godziny.
6) Odwirować lizaty z prędkością 10 000 rpm przez 10 minut i zebrać supernatant.
7) Usunąć nieprzereagowane DCP-Bio1 i inne małe cząsteczki za pomocą kolumn Bio-Rad P6-Spin Columns (PN: 732-6227) zgodnie z instrukcjami producenta.
8) Zmierzyć stężenie białka.
9) Przeprowadzić analizę biochemiczną.

Preparation Note

Produkt może być przechowywany w temperaturze -20°C. Nieotwarty i prawidłowo przechowywany suchy proszek nadaje się do użytku przez co najmniej 4 miesiące od daty otrzymania. Po ponownym rozpuszczeniu roztwór DCP-Bio-1 należy przechowywać w ciemności w temperaturze -20°C. TOKSYCZNOŚĆ: Chociaż związek wydaje się mieć niską toksyczność, nie został poddany szczegółowej ocenie, dlatego należy zachować rutynową ostrożność w laboratorium. Nie jest przeznaczony do spożycia przez ludzi. Ważna uwaga: Podczas transportu niewielkie ilości produktu mogą czasami zostać uwięzione w uszczelnieniu fiolki z produktem. W przypadku produktów o masie 5 mg lub mniejszej zalecamy delikatne uderzenie fiolką o twardą powierzchnię lub krótkie odwirowanie fiolki w wirówce stołowej w celu usunięcia proszku z korka pojemnika.

Analysis Note

DCP-Bio1 Purity: ≥ 90% pure as determined by 1H NMR. DCP-Bio1 Solubility: Freely soluble in DMSO DCP-Bio1 Mw: 396.5

Other Notes

DCP-Bio1 (Part No. CS211419): 1 mg dry powder, stored under argon.

Disclaimer

O ile nie określono inaczej w naszym katalogu lub innej dokumentacji firmy dołączonej do produktu(-ów), nasze produkty są przeznaczone wyłącznie do użytku badawczego i nie mogą być wykorzystywane do żadnych innych celów, w tym między innymi do nieautoryzowanych zastosowań komercyjnych, zastosowań diagnostycznych in vitro, zastosowań terapeutycznych ex vivo lub in vivo lub jakiegokolwiek rodzaju konsumpcji lub zastosowania u ludzi lub zwierząt.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 11 - Combustible Solids
• wgk: WGK 3
• flash_point_f: Not applicable
• flash_point_c: Not applicable