MABN821

Anticorpo anti-proteine con poliQ associate a malattia, clone 3B5H10

clone 3B5H10, from mouse

• Sinonimo/i: Huntingtin mutants with expanded polyQ repeats, HD protein, Huntington disease protein, mHtt, PolyQ disease proteins
• Codice UNSPSC: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.43

Proprietà

• Origine biologica: mouse
• Livello qualitativo: 100
• Forma dell’anticorpo: purified antibody
• Tipo di anticorpo: primary antibodies
• Clone: 3B5H10, monoclonal
• Reattività contro le specie: human
• tecniche: electron microscopy: suitable; immunocytochemistry: suitable; immunohistochemistry: suitable; inhibition assay: suitable; western blot: suitable
• Isotipo: IgG1
• N° accesso UniProt: P42858
• Condizioni di spedizione: ambient
• modifica post-traduzionali bersaglio: unmodified
• Informazioni sul gene: human ... HTT(3064)

Descrizione

Descrizione generale

La proteina huntingtina (UniProt P42858; detta anche proteina HD, proteina della malattia di Huntington) nell′uomo è codificata dal gene HTT (detto anche HD, IT15) (Gene ID 3064). L′errato ripiegamento e l′auto-aggregazione di specifiche proteine sono caratteristiche condivise da malattie neurodegenerative ben note come la malattia di Huntington (HD), la malattia di Alzheimer (AD), la malattia di Parkinson (PD) e la sclerosi laterale amiotrofica (SLA). La presenza di una sequenza ripetuta o espansione anormale di poliglutammine determina il ripiegamento errato della proteina ed è responsabile della neurodegenerazione. L′HD, per esempio, è causata dall′espansione di poliQ nella sequenza codificata dal primo esone della proteina huntingtina (esone 1 di Htt) responsabile della malattia. L′espansione di poliQ comporta la formazione di aggregati fibrillari con molti foglietti beta chiamati amiloide. Esistono altre otto proteine contenenti tratti di poliQ, ma per il resto non correlate con Htt, che determinano l′errato ripiegamento della proteina e neurodegenerazione a causa dell′espansione di poliQ. Evidenze crescenti indicano che le specie maggiormente tossiche sono gli oligomeri solubili o anche i monomeri delle proteine amiloidi responsabili della malattia. Nell′HD, la formazione di aggregati molto grandi di mHtt, i cosiddetti corpi di inclusione (IB), nella fase finale della malattia viene considerata una risposta di difesa per sequestrare le specie più tossiche di mHtt monomeriche o oligomeriche di piccole dimensioni, che si trovano distribuite diffusamente in tutto il neurone.

Specificità

L′epitopo riconosciuto dal clone 3B5H10 risulta esposto in alcune delle molte conformazioni adottate dalle specie di poliQ monomeriche e probabilmente oligomeriche di piccole dimensioni di mHtt, ma è nascosto nelle forme aggregate di alto peso molecolare, come i corpi di inclusione (IB). L′epitopo è presente anche nelle forme mutanti di altre proteine contenenti poliQ responsabili di neurodegenerazione, come il recettore per gli androgeni, l′atrofina e l′atassina 3 Miller, J., et al. (2011). Nat. Chem. Biol. 7(12):925-934).

Immunogeno

Frammento della proteina huntingtina (Htt) umana marcato con tag GST nella regione N-terminale corrispondente alla sequenza codificata dall′esone 1 contenente una regione estesa di 66 glutammine (GST-171-Q66; Miller, J., et al. (2011). Nat. Chem. Biol. 7(12):925-934).

Applicazioni

Analisi in microscopia elettronica: con un lotto rappresentativo sono stati immunocolorati i frammenti N-terminali della proteina huntingtina (Htt) contenenti 97 espansioni della regione di poliQ in neuroni transfettati in modo transiente. Il clone 3B5H10 ha determinato la colorazione della proteina Htt diffusa nel citoplasma, una scarsa colorazione di Htt negli organuli e nessuna colorazione di aggregati di Htt in corpi di inclusione (IB) di grandi dimensioni (Miller, J., et al. (2011). Nat. Chem. Biol. 7(12):925-934).

Immunocitochimica: con un lotto rappresentativo è stata ottenuta l′immunocolorazione dei neuroni esprimenti in modo transiente la proteina hungtintina (Htt) o l′atassina 3 con espansioni della regione di poliQ associate alla malattia (da 46Q a 138Q) ma non dei neuroni esprimenti Htt con 17Q o atassina 3 con 27Q. Il clone 3B5H10 ha determinato la colorazione della proteina Htt mutante (mHff) diffusa nel citoplasma, ma non degli aggregati di Htt in corpi di inclusione (IB) di grandi dimensioni (Miller, J., et al. (2011). Nat. Chem. Biol. 7(12):925-934).

Immunoistochimica: è stato utilizzato un lotto rappresentativo per immunocolorare sezioni di tessuto cerebrale di topi transgenici esprimenti la proteina hungtintina mutante (mHtt) umana associata alla malattia, e anche dei ceppi di topi transgenici BACHD (Htt full-length con 97Q), R6/2 (frammento dell′esone 1 con circa 150Q) e YAC-SCA3 (mHtt full-length con 84Q). Il clone 3B5H10 ha determinato la colorazione della proteina mHtt diffusa nel citoplasma ma non di quella aggregata in grandi corpi di inclusione, se non dopo trattamento con acido formico al 90% (Miller, J., et al. (2011). Nat. Chem. Biol. 7(12):925-934).

Analisi di inibizione: l′uso di un lotto rappresentativo ha bloccato l′aggregazione in vitro del frammento dell′esone 1 di mHtt con 39Q o 53Q e ha scisso le fibrille e gli oligomeri di mHtt già aggregati in monomeri in un esperimento in microscopia a forza atomica (AFM) confermato da una misurazione mediante scattering dinamico della luce (DLS) (Miller, J., et al. (2011). Nat. Chem. Biol. 7(12):925-934).

Western blotting: un lotto rappresentativo ha permesso di rivelare i costrutti di huntingtina (Htt), recettore per gli androgeni (AR) e atrofina contenenti le espansioni della regione di poliQ associate alla malattia (da 65Q a 103Q), ma non i costrutti con 19Q o 25Q, espressi in modo esogeno dalle cellule HEK293 e PC12. Il clone 3B5H10 ha rivelato le forme monomeriche e probabilmente anche quelle oligomeriche corte dei frammenti N-terminali di mHtt, ma non gli oligomeri di grandi dimensioni né gli aggregati ad alto peso molecolare (Miller, J., et al. (2011). Nat. Chem. Biol. 7(12):925-934).

L′anticorpo anti-proteine con poliQ associate a malattia, clone 3B5H10, N° Cat. MABN821, un anticorpo monoclonale di topo altamente specifico, riconosce le proteine con poliQ associate alla malattia ed è stato testato in microscopia elettronica, immunocitochimica, immunoistochimica, studi di inibizione e Western blotting.

Qualità

Valutata mediante il Western blotting di frammenti ricombinanti di mHtt con 134Q e di wHtt con 17Q.

Western blotting: questo anticorpo alla concentrazione di 0,5 µg/mL ha rivelato il frammento N-terminale codificato dall′esone 1 della proteina huntingtina con 134 espansioni di glutammina/Gln (134Q) ma non il corrispondente frammento normale (wild-type) con 17Q.

Descrizione del bersaglio

Variabile, dipendente dal numero di poliQ. La regione di poliQ della proteina huntingtina (Htt) è altamente polimorfica e si può espandere dalle 10 alle 35 sequenze ripetute presenti nella popolazione normale fino a 120 o più nei pazienti con malattia di Huntington. 347,6 kDa, calcolati in base alla sequenza riportata da UniProt P42858.

Stato fisico

Formato: purificato

Altre note

Concentrazione: fare riferimento alla scheda tecnica specifica del lotto.

Informazioni sulla sicurezza

• Codice della classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 1