Sejtproliferációs ELISA, BrdU (kolorimetrikus) protokoll és hibaelhárítás

Termékszám:  11647229001

Protokoll

Mérés különböző hullámhosszon


Lehetőség van a színfejlődés mérésére egy bizonyos idő alatt, stopoldat hozzáadása nélkül, 370/492 nM-nél mérve, így könnyen meghatározhatók az optimális kísérleti körülmények.

Stopoldat hozzáadásával és 450/690 nM-en történő méréssel könnyebben mérheti a pontos értéket a kísérlet egy adott időpontját követően.

A WST-1 sejtproliferációs reagens és a BrdU sejtproliferációs ELISA, kolorimetrikus


A Roche ′Apoptózis, citotoxicitás és sejtproliferáció kézikönyv′ 52a. ábrája., 4^th kiadás a WST-1 sejtproliferációs reagens és a BrdU kolorimetrikus sejtproliferációs ELISA kombinált használatát mutatja a sejtek életképességének és sejtproliferációjának egyidejű mérésére. A protokollt röviden az ábra legendája ismerteti. A vizsgálatok egyidejű elvégzéséhez rendelje meg mindkét készletet; további információkat a megfelelő csomagmellékletek tartalmaznak.

A stimulációs index kiszámítása

A stimulációs index kiszámításához először számítsa ki a duplikátumok/triplikátumok átlagát, majd vonja le az egyes minták és kontrollok háttérértékét (sejtek nélkül). A minták (stimulált sejtek) értékeit ezután elosztjuk a negatív kontrollal (kezeletlen minták). Ez relatív értékeket eredményez (egységek nélkül), amelyek összehasonlíthatók a különböző vizsgálatok között. Ami a jelentős stimuláció meghatározását illeti, ezt a kutatók tapasztalatai alapján kell meghatározni minden egyes kísérleti elrendezés esetében, mivel erősen függ a sejttípusoktól, a stimulációtól és más befolyásoló tényezőktől.

Hibaelhárítás

Lymphocyták alacsony jelintenzitása


A lymphocyták proliferációjának vizsgálatához a sejteket stimulálják, pl, növekedési faktorokkal, citokinekkel vagy mitogénekkel. A sejtek számának növekedése a limfociták sejtklaszterek kialakulásához vezethet: Az azonos progenitorból származó sejtek összetapadnak és aggregátumokat képeznek a tenyészlemezen. Ez a hatás megzavarhatja az ELISA-rendszer antitestfelismerését, ami a válasz alulbecsléséhez vezethet. A jelváltozások elkerülése érdekében a BrdU-jelölés után és a táptalaj eltávolítása előtt a sejteket óvatosan, pipettázással reszuszpendálja újra. Ez lehetővé teszi az egyes sejtek egyenlő hozzáférhetőségét a BrdU-jelző antitest felismeréséhez.

Ez a probléma leginkább a szuszpenziós sejteket, például a limfocitákat érinti. Ha ezt a problémát adherens sejteknél tapasztalja, távolítsa el a jelölőközeget a jelölési periódus befejezése után, és óvatosan tripszinálja a sejteket, hogy egyes sejteket kapjon; centrifugálja a mikrolemezt, és szárítsa meg a sejteket, ahogyan azt a szuszpenziós sejtekre vonatkozó betegtájékoztatóban leírták; majd végezze el a szokásos eljárást.

A sejttenyésztési rendszerek nagymértékben eltérhetnek a sejtek száma, a proliferációs aktivitás és az inkubációs időszakok tekintetében, ami túl magas vagy túl alacsony abszorbanciaértékeket eredményezhet.

Az abszorbanciaértékek túl magasak vagy túl alacsonyak lehetnek.