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COLLB-RO

Roche

Collagénase B

from Clostridium histolyticum

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About This Item

Numéro de classification (Commission des enzymes):
3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
Code UNSPSC :
12352204

Source biologique

Clostridium histolyticum

Niveau de qualité

100

Stérilité

non-sterile

Forme

lyophilized

Conditionnement

pkg of 100 mg (11088807001)
pkg of 2.5 g (11088831001)
pkg of 500 mg (11088815001)

Fabricant/nom de marque

Roche

Concentration

0.5-2.5 mg/mL

pH optimal

6.0-8.0

Application(s)

sample preparation

Température de stockage

2-8°C

Description générale

La collagénase B est préparée à partir de cultures de Clostridium histolyticum par filtration, précipitation au sulfate d′ammonium, dialyse et lyophilisation. La collagénase issue de Clostridium histolyticum est une enzyme collagénolytique. Elle interagit avec des substances ressemblant au collagène et est responsable de la dégradation du collagène en peptides de petite taille. Elle est largement utilisée pour désagréger de nombreux types de tissus (poumon, cœur, muscle, os, tissu adipeux, foie, rein, cartilage, glande mammaire, placenta, vaisseaux sanguins, cerveau, tumeurs, par exemple) et pour préparer des suspensions unicellulaires destinées à la mise en place de systèmes de culture de cellules primaires. Il est recommandé d′utiliser la collagénase B lorsque le rendement et la viabilité revêtent un caractère critique.

Spécificité

La collagénase dégrade le collagène natif. La clostripaïne, les enzymes de type trypsine et les protéases neutres dégradent également d′autres protéines.

Application

La collagénase Roche issue de Clostridium a servi à la préparation de cellules de nombreux type de tissus différents, notamment des hépatocytes, des adipocytes, des îlots de Langerhans, des cellules épithéliales, des cellules musculaires, des cellules endothéliales, etc. Il convient néanmoins de déterminer empiriquement la capacité de chaque lot de l′enzyme à s′attaquer à un tissu particulier.
La collagénase B a été utilisée pour préparer des cellules d′aorte de souris et de tissus de cancer colorectal.

Caractéristiques

Activité enzymatique :
Activité collagénase : >0,15 U/mg (selon Wünsch) (à +25 °C, substrat : 4-phényl-azobenzyl-oxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg)
Activités d′enzymes contaminantes : activité trypsine, clostripaïne et protéase neutre.
La collagénase B présente une activité collagénase normale à élevée et une activité clostripaïne plus haute que la moyenne (généralement > 10 U/mg).

Inhibiteurs :
Inhibiteurs de collagénases : EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-mercaptoéthanol
La collagénase n′est pas inhibée par le sérum.
Inhibiteurs de la clostripaïne : TLCK
Inhibiteurs de la trypsine : aprotinine, inhibiteur de trypsine (blanc d′œuf, soja), sérum

Définition de l'unité

L′activité de la collagénase fournie par Roche est exprimée en unités de Wünsch (1 μmol de produit formé par minute à +25 °C avec le substrat de Wünsch).
Les activités collagénasessont souvent exprimées en unités de Mandl (1 μmol de leucine libérée à partir de collagène en 5 heures à +37 °C).
Malheureusement, il n′existe pas de facteur de conversion constant entre ces deux unités d′activité, car l′unité de Mandl est en partie dépendante de la concentration de protéases contaminantes dans la préparation de collagénase, ce qui constitue une variable non définie. Comparativement à une préparation brute, une préparation de collagénase pure donnerait une activité spécifique en unités Mandl plus faible. Les préparations de Clostridium donnent habituellement des facteurs de conversion d′environ 1/1800 (par exemple, un lot particulier de collagénase de Clostridium contenait environ 0,15 U Wünsch/mg et 250 U Mandl/mg).

Notes préparatoires

Activateur : Ca2+
Concentration de travail : 0,5 à 2,5 mg/ml
Conditions de stockage (solution de travail) : -15 à -25 °C
Roche recommande de ne reconstituer que la quantité de lyophilisat nécessaire pour une utilisation immédiate. La solution reconstituée peut être conservée jusqu′à une semaine entre -15 et -25 °C. Éviter les congélations et décongélations répétées, car l′activité diminue après reconstitution.

Reconstitution

Reconstitution dans n′importe quelle solution saline équilibrée (HBSS par exemple).

Autres remarques

Pour la recherche en sciences de la vie uniquement. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.

Pictogrammes

Exclamation markHealth hazard
GHS07,GHS08

Mention d'avertissement

Danger

Mentions de danger

H315 - H319 - H334 - H335

Classification des risques

Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3

Organes cibles

Respiratory system

Code de la classe de stockage

11 - Combustible Solids

Classe de danger pour l'eau (WGK)

WGK 1

Point d'éclair (°F)

does not flash

Point d'éclair (°C)

does not flash

Certificats d'analyse (COA)

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