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Roche

Dispase® II (protéase neutre, type II)

lyophilized, from bacterial, Roche, pkg of 5 × 1 g

Synonyme(s) :

dissociation tissulaire, enzyme de dissociation, protéase neutre

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About This Item

Numéro de classification (Commission des enzymes):
3.4.24.4 (BRENDA, IUBMB)
Code UNSPSC :
12352204
Nomenclature NACRES :
NA.28

Source biologique

bacterial

Niveau de qualité

100

Stérilité

non-sterile

Forme

lyophilized

Activité spécifique

≥0.8 units/mg protein (37 °C, casein as substrate, pH 7.5)

Conditionnement

pkg of 5 × 1 g

Fabricant/nom de marque

Roche

pH optimal

6.0-8.5

Application(s)

sample preparation

Catégories apparentées

Description générale

La dispase est une protéase neutre, à action rapide mais douce, qui sépare sous forme intacte l'épiderme du derme. Elle sépare également du substrat de culture les cellules épithéliales sans les endommager. Elle clive la zone de la membrane basale et laisse les cellules épithéliales intactes.

Spécificité

La dispase est une métalloprotéase non spécifique.

Application

La Dispase® est utilisée dans la préparation de cellules provenant d'un vaste éventail de tissus et organes. Cette enzyme s'est avérée être un agent rapide, efficace mais doux permettant de dégrader la matrice extracellulaire des tissus afin de libérer des cellules individuelles en vue de leur mise en culture (culture de cellules primaires), ou de récolter des cellules déjà cultivées pour les transférer sur un nouveau substrat (culture secondaire). Elle sert également à empêcher l′agglutination indésirable des cellules cultivées en suspension.

Caractéristiques et avantages

  • Agent doux, mais rapide et efficace qui permet de libérer les cellules en les endommageant le moins possible
  • Préserve l'intégrité des membranes cellulaires
  • D'origine non mammifère : absence de contamination par les mycoplasmes et les virus animaux
  • Extrêmement stable aux variations de température et de pH et aux interférences dues aux constituants du sérum
  • Facile à inactiver avec des agents chélateurs ou par dilution
  • Induit une activité supérieure tout en étant plus facile à utiliser

Définition de l'unité

Une unité équivaut à l′activité enzymatique qui permet de libérer les acides aminés et peptides sensibles au réactif de Folin correspondant à 1 μmol (181 μg) de tyrosine en 1 minute dans les conditions d′essai (pH 7,5, +37 °C).
Une comparaison pratique réalisée entre les unités Roche de la Dispase® II et celles citées dans la littérature japonaise (où des concentrations en Dispase® de 1 000 à 2 000 unités/ml sont courantes) suggère qu′une unité Roche équivaut à environ 600 unités de dispase japonaises.
Une unité de Dispase® Roche Applied Science équivaut à 181 unités de protéase (PU), laquelle unité correspond à la libération d′acides aminés équivalant à 1 μg de tyrosine par min et par ml à pH 7,5 et +37 °C.

Notes préparatoires

Activateur : La concentration en Ca2+ optimale est 2 mM. Les préparations enzymatiques contiennent suffisamment de Ca2+ pour une activité optimale.
Inhibiteurs : EDTA, EGTA, Hg2+, autre métaux lourds. La dispase n'est pas inhibée par le sérum.
Concentration de travail : 0,6 à 2,4 U/ml
Solution de travail : Préparation de la solution mère et de la solution de travail :

Pour produire une solution mère à 10 mg/ml, dissoudre l′enzyme Dispase® II lyophilisée dans une solution saline tamponnée à l′HEPES (HEPES/KOH 50 mM à pH 7,4, NaCl 150 mM). Pour produire la solution de travail, diluer la solution mère ci-dessus avec le milieu de culture destiné aux cellules isolées, à une concentration finale comprise entre 0,6 et 2,4 U/ml. Veuillez noter qu′il n′est pas recommandé d′utiliser des concentrations supérieures à 2,4 U/ml. Pour un résultat optimal, filtrer la solution de travail sur une membrane de filtration de 0,22 μm.
Conditions de stockage (solution de travail) : -15 à -25 °C
La solution mère reconstituée est stable 2 semaines entre 2 et 8 °C. Pour un stockage jusqu′à 2 mois, congeler la solution mère en aliquotes. Éviter les congélations et décongélations répétées ! La solution de travail diluée avec du PBS est stable entre 2 et 8 °C pendant 3 jours.

Stockage et stabilité

À conserver entre 2 °C et 8 °C (au sec !).

Autres remarques

Produit réservé à la recherche en sciences de la vie. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.

Informations légales

Dispase is a registered trademark of Godo Shusei Co., Ltd.

Pictogrammes

Exclamation markHealth hazard
GHS07,GHS08

Mention d'avertissement

Danger

Mentions de danger

H315 - H319 - H334 - H335

Classification des risques

Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3

Organes cibles

Respiratory system

Code de la classe de stockage

11 - Combustible Solids

Classe de danger pour l'eau (WGK)

WGK 1

Point d'éclair (°F)

does not flash

Point d'éclair (°C)

does not flash

Certificats d'analyse (COA)

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