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Sigma-Aldrich

Dispase® II

protease

Synonyme(s) :

Protéase from Bacillus polymyxa

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About This Item

Numéro CAS:
42613-33-2
Numéro CE :
255-914-4
Numéro MDL:
MFCD02253017
Code UNSPSC :
12352204
Nomenclature NACRES :
NA.54

Niveau de qualité

100

Forme

lyophilized solid

Activité spécifique

≥0.5 units/mg solid

Technique(s)

cell culture | mammalian: suitable
single cell analysis: suitable

Solubilité

10 mM NaAc (pH 7.5) and 5 mM CaAc: soluble

Température de stockage

2-8°C

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Application

L'enzyme proposée par Sigma a été utilisée pour mettre au point un protocole de culture ex vivo de bourgeons mammaires embryonnaires de souris. Elle a servi à traiter des fragments de cœur de rat pour l'isolement de mitochondries de cette source. Elle a également été utilisée pour l'isolement de cellules souches de pulpe dentaire par hydrolyse enzymatique. Ces cellules ont été comparées aux cellules souches de pulpe dentaire isolées par une méthode d'explantation en vue d'analyser leurs propriétés de cellules souches et de différenciation.
La dispase® II a été utilisée pour le triage de cellules marquées par fluorescence (FACS, fluorescence-activated cell sorting). Elle a également été employée pour séparer les couches de la vésicule vitelline viscérale.
Ce produit peut être utilisé pour préparer des suspensions de cellules individuelles en vue d'un séquençage.

Actions biochimiques/physiologiques

La Dispase® II est une protéase neutre qui hydrolyse les liaisons peptidiques N-terminales des résidus d′acides aminés non polaires. Elle peut être utilisée pour la dissociation de nombreux types de tissus et de cellules cultivées in vitro. Cette enzyme est d′une nature très douce et n′endommage pas les membranes cellulaires. Elle peut être utilisée pour empêcher les agglomérats de cellules dans les cultures en suspension. Cette protéase clive la fibronectine et le collagène de type IV, mais pas la laminine, le collagène de type V, l′albumine sérique ou la transferrine. La Dispase® II clive spécifiquement les liaisons entre les résidus leucine et phénylalanine. Les cations Ca2+, Mg2+, Mn2+, Fe2+, Fe3+ et Al3+ activent l′enzyme. L′EDTA, l′EGTA, Hg2+ et les autres métaux lourds inhibent l′activité de cette enzyme. Cette enzyme contient 1 atome-gramme de zinc par molécule-gramme d′enzyme purifiée. Si le coenzyme zinc est retiré par des agents chélateurs tels que l′EDTA ou l′EGTA, on obtient une apoenzyme inactive. Cette enzyme n′est pas inhibée par le sérum.

Définition de l'unité

Une unité hydrolyse la caséine et produit une couleur équivalente à 1,0 μmole (181 μg) de tyrosine par min à pH 7,5 et à 37 °C (couleur obtenue avec le réactif de Folin-Ciocalteu), sauf indication contraire.

Forme physique

poudre lyophilisée contenant de l′acétate de calcium et du sucre lactique

Notes préparatoires

Une solution mère à 50 U/ml peut être préparée en dissolvant la poudre dans un tampon contenant 10 mM NaAc (pH 7,5) et 5 mM CaAc. Il est recommandé de la conserver à 4 °C.

Remarque sur l'analyse

L′enzyme peut être initialement dissoute à une concentration de 10 mg/ml dans un tampon HEPES/KOH 50 mM, pH 7,4 avec 150 mM NaCl. Les dilutions ultérieures doivent être réalisées dans le milieu de culture adapté aux cellules à dissocier. La Dispase est une métalloprotéinase activée par les cations divalents, notamment Ca2+, Mg2+, Mn2+ et Fe2+.

Informations légales

Dispase is a registered trademark of Godo Shusei Co., Ltd.

Pictogrammes

Health hazardExclamation mark
GHS08,GHS07

Mention d'avertissement

Danger

Mentions de danger

H315,H319,H334,H335

Classification des risques

Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3

Organes cibles

Respiratory system

Code de la classe de stockage

11 - Combustible Solids

Classe de danger pour l'eau (WGK)

WGK 3

Point d'éclair (°F)

Not applicable

Point d'éclair (°C)

Not applicable

Certificats d'analyse (COA)

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