COLLD-RO

Collagénase D

from Clostridium histolyticum

• Numéro de classification (Commission des enzymes): 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• Code UNSPSC : 12352204

Propriétés

• Source biologique: Clostridium histolyticum
• Niveau de qualité: 100
• Stérilité: non-sterile
• Forme: lyophilized
• collagenase activity: >0.15 U/mg lyophilizate
• Conditionnement: pkg of 100 mg (11088858001); pkg of 2.5 g (11088882001); pkg of 500 mg (11088866001)
• Fabricant/nom de marque: Roche
• Concentration: (working concentration: 0.5 - 2.5 mg/ml)
• Technique(s): tissue processing: suitable
• Couleur: light brown
• pH optimal: 6.0-8.0
• Solubilité: water: soluble
• Numéro d'accès NCBI: WP_171012037
• Application(s): cell analysis
• Activité étrangère: Clostripain 0.060 U/mg; Proteases 8 U/mg ( Azocoll); Trypsin <0.2 U/mg (with BAEE)
• Température de stockage: 2-8°C

Description

Description générale

La collagénase D est préparée à partir de cultures de Clostridium histolyticum par filtration, précipitation au sulfate d'ammonium, dialyse et lyophilisation.

Spécificité

La collagénase dégrade le collagène natif. La clostripaïne, les enzymes du type trypsine et les protéases neutres dégradent également d'autres protéines.

Application

La collagénase de C. histolyticum est largement utilisée pour désagréger de nombreux types de tissus (poumon, cœur, muscle, os, tissu adipeux, foie, rein, cartilage, glande mammaire, placenta, vaisseaux sanguins, cerveau, tumeurs, cordon ombilical par exemple) et pour préparer des suspensions unicellulaires destinées à la mise en place de systèmes de culture de cellules primaires. Il est recommandé d'utiliser la collagénase D lorsque la fonctionnalité et l'intégrité des protéines de la surface cellulaire sont importantes.
La collagénase Roche issue de Clostridium a servi à la préparation de cellules de nombreux type de tissus différents, notamment des hépatocytes, des adipocytes, des îlots de Langerhans, des cellules épithéliales, des cellules musculaires, des cellules endothéliales, etc. Il convient néanmoins de déterminer empiriquement la capacité de chaque lot de l'enzyme à s'attaquer à un tissu particulier.

Caractéristiques et avantages

Sommaire
Lyophilisat non stérile

Définition de l'unité

La collagénase de Roche est dosée en unités Wünsch (1 μmol de produit formé par minute à +25 °C avec du substrat Wünsch).
L′activité de la collagénase est fréquemment indiquée en unités Mandl (1 μmol de leucine libérée par du collagène en 5 heures à +37 °C).
Malheureusement il n'existe aucun facteur de conversion cohérent entre les deux unités d'activité, car l'unité Mandl dépend en partie de la concentration en protéases contaminantes dans la préparation de collagénase, une variable impossible à définir. Comparativement à une préparation brute, une préparation de collagénase pure donnerait une activité spécifique en unités Mandl plus faible. Les préparations de Clostridium donnent habituellement des facteurs de conversion d′environ 1/1800 (par exemple, un lot particulier de collagénase de Clostridium contenait environ 0,15 U Wünsch/mg et 250 U Mandl/mg).

Forme physique

Lyophilisat non stérile

Notes préparatoires

Activateur : Ca²⁺
Concentration de travail : 0,5 - 2,5 mg/ml
Conditions de stockage (solution de travail) : -15 à -25°C
Roche recommande de ne reconstituer que la quantité de lyophilisat nécessaire pour une utilisation immédiate. La solution reconstituée peut être conservée jusqu'à une semaine entre -15 et -25 °C. Éviter les congélations et décongélations répétées, car l'activité diminue après reconstitution.

Inhibiteurs:
Inhibiteurs de collagénases : EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-mercaptoéthanol
La collagénase n'est pas inhibée par le sérum.
Inhibiteurs de la clostripaïne : TLCK
Inhibiteurs de la trypsine : aprotinine, inhibiteur de trypsine (blanc d'œuf, soja)

Activité enzymatique :
Activité collagénase : >0,15 U/mg (selon Wünsch) (à +25 °C, substrat : 4-phényl-azobenzyl-oxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg)
Activités d'enzymes contaminantes : activité trypsine, clostripaïne et activité protéolytique totale
La collagénase D présente une activité collagénase normale à élevée et une très faible activité trypsique (généralement < 0,2 unités/mg, substrat : BAEE).

Reconstitution

Reconstitution dans n'importe quelle solution saline équilibrée (HBSS par exemple).

Stockage et stabilité

Conserver à l'abri de la lumière.

Autres remarques

Pour la recherche en sciences de la vie uniquement. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.

Informations sur la sécurité

• Pictogrammes: GHS07,GHS08
• Mention d'avertissement: Danger
• Mentions de danger: H315 - H319 - H334 - H335
• Conseils de prudence: P261 - P264 - P280 - P284 - P304 + P340 + P312 - P342 + P311
• Classification des risques: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Organes cibles: Respiratory system
• Code de la classe de stockage: 11 - Combustible Solids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 1
• Point d'éclair (°F): does not flash
• Point d'éclair (°C): does not flash