Prestige Antibodies® Značky organel
Organelové markery ve studiích subcelulární lokalizace
Studie subcelulární lokalizace jsou důležité pro mapování a charakterizaci proteinů, a tím i pro lepší pochopení buněčných funkcí proteinů. Pomocí analýzy konfokální mikroskopie na lidských buněčných liniích lze vizualizovat prostorové a časové vzorce exprese proteinů na jemné buněčné a subcelulární úrovni. Pro usnadnění interpretace subcelulární distribuce proteinu, na který je zaměřena specifická protilátka, mohou být buňky obarveny referenčními markery pro různé subcelulární struktury, organely v buňkách. Například v projektu Human Protein Atlas byla jako referenční marker pro endoplazmatické retikulum (ER) zvolena protilátka proti kalretikulinu. To je znázorněno na obrázku 1. Například pro automatickou anotaci kolokalizačních analýz jsou pro každý subcelulární kompartment, který má být analyzován, zapotřebí markery specifické pro jednotlivé organely.
Obrázek 1. Barvení anti-HSP90B1 (HPA003901) je znázorněno zeleně, jaderný referenční DAPI modře a referenční marker endoplazmatického retikula (ER) detekující kalretikulin žlutě. Žlutý signál se překrývá se zeleným signálem protilátky, což potvrzuje specifičnost pro ER.
Prestige Antibodies® Panel organelových markerů
Ve spolupráci s projektem Human Protein Atlas byla vyvinuta řada referenčních markerů pro různé organely, které jsou nyní vydávány v první verzi Panelu organelových markerů zaměřeného na 11 různých subcelulárních struktur v buňce. Ty jsou uvedeny na obrázku 3 a tabulce 1.
Organelové markery panelu byly vybrány především na základě specifického rozpoznání cíle nad řadou běžně používaných lidských buněčných linií, jako jsou A-431, U-251 MG, U-2 OS, HeLa a MCF-7. Mezi další kritéria výběru markerů patří vysoký poměr signálu k šumu, shoda exprese proteinu a RNA podle dat RNA Seq, detekce pásu očekávané velikosti cíle ve WB a také korelace pozitivity s výsledky jiných protilátek vůči stejnému proteinovému cíli.
Tyto monoklonální organelové markery byly vyvinuty společně jako panel za stejně přísných podmínek jako monoklonální protilátky Prestige, což zaručuje zajištěnou kontinuitu a stabilní dodávky.
Většina organelových markerů v tomto panelu je doporučena také pro aplikace Western Blot (WB) a imunohistochemii (IHC), jak ukazuje příklad s Anti-TUFM na obrázku 2.
Anti-TUFM, příklad organelového markeru
Obrázek 2. Mitochondrie lze detekovat pomocí protilátky namířené proti TUFM (Tu translation elongation factor), proteinu specificky exprimovanému v mitochondriích. Monoklonální protilátka proti TUFM, AMAb90966, vykazuje specifický signál v různých aplikacích, včetně imunofluorescenční imunocytochemie (IF-ICC), chromogenní a fluorescenční imunohistochemie (IHC a IF-IHC) a také v metodě Western Blot (WB). A) IF-ICC barvení buněčné linie HeLa pomocí AMAb90966 ukazuje výraznou imunoreaktivitu v mitochondriích (zeleně). Jádra jsou zobrazena modře (DAPI) a mikrotubuly červeně. B) Barvení IHC-IF tkáně lidského tlustého střeva s imunoreaktivitou v mitochondriích Anti-TUFM zobrazenou zeleně, plazmatickými membránami modře (Anti-EZR, AMAb90979, IgG2b) a jádry červeně (Anti-HNRNPC, AMAb91010, IgG2a). To ilustruje, že při detekci pomocí sekundárních protilátek specifických pro jednotlivé subtypy lze současně použít tři myší monoklonální protilátky různých subtypů. C) IHC-IF barvení lidské kůže s imunoreaktivitou Anti-TUFM zobrazenou zeleně a jádry modře. D) IHC barvení lidské kůže a E) placenty. F) WB analýza lidských buněčných linií U251 MG (1), A-431 (2), U-2 OS (3) a MCF-7 (4).
IF snímky 11 různých subcelulárních organel v lidské buněčné linii HeLa
Obrázek 3. Imunofluorescenční snímky zobrazující 11 různých subcelulárních organel v lidské buněčné linii HeLa s použitím monoklonálních protilátek jako markerů, barvení protilátek je znázorněno zeleně. Mikrotubulární a jaderné sondy jsou vizualizovány červeně, resp. modře (pokud jsou k dispozici).
Monoklonální protilátky obsažené v panelu organelových markerů
Tento panel organelových markerů složený z myších monoklonálních protilátek proti vybraným důležitým subcelulárním místům pro mapování, charakterizaci a odhalení úlohy proteinu v buněčných procesech lze použít jako referenci pro barvení a potvrzení umístění proteinu, který vás zajímá. Členové panelu byli vybráni pro vysoké hladiny RNA v co největším počtu buněčných linií a jsou validováni v ICC-IF až v pěti buněčných liniích. Většina z nich je rovněž validována v IHC a WB. Všichni členové panelu patří ke značce Prestige Antibody a byli vyvinuti za stejně přísných podmínek, se zajištěnou kontinuitou a stabilními dodávkami.
O projektu Human Protein Atlas
Projekt Human Protein Atlas byl zahájen v roce 2003 švédskými vědci pod vedením profesora Mathiase Uhléna a financován Nadací Knuta a Alice Wallenbergových. Jedná se o jedinečné světové úsilí provádějící systematický průzkum lidského proteomu pomocí protilátek. Projekt Human Protein Atlas nyní může představit kompletní mapu exprese proteinů ve všech hlavních orgánech a tkáních lidského těla.
Projekt Human Protein Atlas vytvořil expresní mapu kompletního lidského proteomu. Za tímto účelem byly vyvinuty vysoce specifické prémiové protilátky proti všem lidským genům kódujícím bílkoviny a pomocí tkáňových matic bylo vytvořeno profilování bílkovin v mnoha tkáních a buňkách. Expresní data jsou k dispozici z validace specifické pro danou aplikaci. Použité aplikace jsou imunohistochemie, Western blot analýza, analýza proteinových polí a konfokální mikroskopie založená na imunofluorescenci.
Abyste mohli pokračovat ve čtení, přihlaste se nebo vytvořte účet.
Nemáte účet?