Počítání buněk a analýza zdraví

Buňky v kultuře je třeba počítat pro sledování doby zdvojení a pro kvantifikaci před experimenty nebo výrobními procesy. Kultivované buňky vyžadují rutinní sledování nejen proliferace, ale i životaschopnosti, cytotoxicity a dalších ukazatelů stavu buněk. Volba testu závisí na typu buněk v kultuře, aplikaci studie a požadované výkonnosti. Kvantitativní stanovení nebo počítání kultivovaných buněk před subkultivací nebo následným použitím při transfekcích, genomických studiích, kryokonzervaci nebo jiných manipulacích je velmi důležité.    

Související technické články

• Ruční počítadlo buněk Scepter™ 3.0
  Scepter™ Cell Counter je přenosné zařízení, které přináší konzistentní počítání buněk přímo do kultivační kapoty za méně než 30 sekund.
• Apoptosis Assays
  Cellular apoptosis assays to detect programmed cell death using Annexin V, Caspase and TUNEL DNA fragmentation assays.
• Scepter™ 3.0 Cell Counter – How it Works
  Scepter™ counting is 7 to 10 times faster than hemocytometry-and also faster than other automated counters. Learn more about how this amazing technology works
• Detekce, prevence a eliminace mykoplazmat v buněčných kulturách
  Zjistěte kontaminaci mykoplasmou v buněčné kultuře pomocí PCR, barvení DNA nebo kultivačních testů. Objevte soupravy pro prevenci, eliminaci a detekci mykoplazmy.
• Zobrazit vše (17)

Související protokoly

• Protokol MTT testu životaschopnosti a proliferace buněk
  Protokol testu MTT pro měření životaschopnosti, proliferace a cytotoxicity buněk. Pokyny pro přípravu činidla MTT a příklady použití.
• Průvodce protokolem testu XTT na životaschopnost a proliferaci buněk
  Provádějte kolorimetrické testy pro neradioaktivní kvantifikaci buněčné proliferace, životaschopnosti a cytotoxicity pro adherentní nebo suspenzní buňky kultivované v 96jamkových mikrodestičkách.
• Protokol testu WST-1 pro stanovení životaschopnosti buněk
  Protokol testu WST-1 pro měření životaschopnosti buněk a cytotoxicity s pokyny pro přípravu, aplikacemi, nejčastějšími dotazy a řešením problémů.
• Testy propustnosti in vitro
  Test propustnosti Caco-2 hodnotí propustnost sloučenin přes střevní bariéru a podporuje farmaceutické, chemické a spotřebitelské přípravky.
• Testy metabolické stability
  Testy metabolické stability měří rychlost mizení sloučeniny v mikrosomální nebo hepatocytární inkubaci pro výpočet vnitřní clearance.
• Zobrazit vše (16)

Další články a protokoly

Zadejte klíčová slova

Manuální počítání buněk

Kamery na počítání buněk, jako je hemocytometr s Neubauerovými mřížkami, jsou běžná zařízení pro manuální/vizuální počítání buněk. Malý alikvotní podíl buněčné suspenze se vloží do komory přístroje s mřížkou z přesně broušeného skla , kde se kapilárním působením rozptýlí po vyleptané mřížce. Buňky se vizualizují pod mikroskopem a počítají se pomocí manuálního počítadla. K výpočtu koncentrace buněk se používá předem definovaný objem komory a systém mřížek. K dispozici jsou systémy založené na zobrazování, které proces počítání automatizují.

Automatické počítání buněk

Mnoho přístrojů pro automatické počítání buněk používá stejná vizuální barviva a principy používané v hemocytometrii. Na rozdíl od automatických počítadel buněk, která se spoléhají na rozpoznávání objektů, si zařízení založená na Coulterově principu získala oblibu pro svou použitelnost a přesnost. Coulterova počítadla čerpají buněčné suspenze přes senzor, který detekuje buňky na základě změny elektrického odporu. To umožňuje spolehlivější detekci buněk, dokonce i malých buněk, a vysoce přesné počítání buněk. Přenosné modely, které se drží v ruce (podobně jako pipeta), umožňují počítat buňky přímo z kultivačního krytu.

Testy životaschopnosti buněk

Syntéza DNA: Sledování aktivní syntézy DNA v buňkách je základem některých testů buněčné proliferace. Replikaci DNA lze měřit pomocí modifikovaných nukleosidů, jako je radioaktivní 3H-Thymidin nebo neradioaktivní bromodeoxyuridin (BrdU), který se detekuje pomocí protilátky.

Metabolická aktivita: Kalorimetrické testy, které měří metabolickou aktivitu, jsou vhodné pro analýzu buněčné proliferace, životaschopnosti buněk a cytotoxicity. K redukci tetrazoliových solí, jako jsou MTT, XTT a WST-1, na barevné sloučeniny formazanu dochází pouze v metabolicky aktivních buňkách. Přítomnost ATP je rovněž indikátorem metabolické aktivity. V reportérovém testu světlušky luciferázy se ATP produkovaný dělícími se buňkami používá k oxidaci D-luciferinu, který dává bioluminiscenční světlo jako čidlo.

Vyloučení barviva: Pro počítání životaschopných buněk se běžně používá barvení trypanovou modří. Tato metoda je založena na principu, že živé buňky barvivo nepřijímají, zatímco mrtvé buňky barvivo přijímají a pod mikroskopem se jeví modře.

Fluorescenční stanovení životaschopnosti buněk: Značení 5(6)-karboxyfluorescein diacetátem N-sukcinimidylesteru (CFSE) je oblíbenou volbou pro měření počtu dokončených cyklů buněčného dělení v buněčné populaci. Další barvivo propustné pro membrány, kalcein-AM, samo o sobě nefluoreskuje, ale po hydrolyzaci v životaschopné buňce vyzařuje silnou zelenou fluorescenci. Naproti tomu jaderné barvivo propidium jodid (PI) se do jádra dostane pouze průchodem přes narušenou membránu mrtvých buněk. Vzhledem k tomu, že kalcein i PI-DNA lze excitovat světlem o vlnové délce 490 nm, je možné současné sledování živých a mrtvých buněk pomocí fluorescenčního mikroskopu s jednou excitací.