Průtoková cytometrie

Protilátky a značky pro průtokovou cytometrii

Provádění analýzy průtokovou cytometrií zahrnuje použití různých protilátek a značek pro průtokovou cytometrii. Protilátky pro průtokovou cytometrii se používají ke specifické vazbě na různé buněčné markery, což pomáhá charakterizovat typ buněk a v rámci experimentu posoudit případné změny v expresi proteinů. K vizualizaci protilátek pro detekci v průtokovém cytometru lze v závislosti na návrhu experimentu použít řadu typů značek, včetně barviv nukleových kyselin, barviv pro životaschopnost buněk, polymerních barviv, kvantových teček, malých organických molekul a fluorescenčních proteinů. Protilátky se obvykle značí přímou konjugací (buď jako komerčně dostupné produkty, nebo konjugační soupravy umožňující koncovému uživateli provést reakci), nebo pomocí sekundárních protilátek. 

Použití průtokové cytometrie

Průtokovou cytometrii využívá řada oborů a často analyzuje více parametrů v různých populacích buněk. Mezi běžné aplikace v molekulární biologii patří analýza rekombinantně exprimovaných fluorescenčních proteinů, které mají indukovanou expresi v různých typech buněk za účelem objasnění funkce genů nebo pro in vivo sledování buněk. Zatímco barvení DNA umožňuje analýzu buněčného cyklu, použití protilátek umožňuje širokou škálu analýz včetně, přenosu signálu, RNA a exprese proteinů. Imunofenotypizace je však jednou z nejčastěji používaných aplikací průtokové cytometrie. Při imunofenotypizaci se protilátky konjugované s fluorochromem zaměřují na více povrchových antigenů buněk, aby bylo možné identifikovat specifické imunitní buňky v populaci buněk.

Analýza dat průtokové cytometrie

Analýza dat průtokové cytometrie často zahrnuje identifikaci specifické oblasti buněk nebo shluku a použití dalších parametrů v rámci experimentu, včetně zkoumání, zda jsou přítomny další faktory identifikující buňky, aby bylo možné získat další informace o buněčné identitě. K dispozici je řada počítačových softwarových programů, které se běžně používají k usnadnění tohoto druhu analýzy dat a dalších analýz buněčného cyklu.

Přístrojové vybavení pro průtokovou cytometrii

Souhrn základních komponent používaných v průtokových cytometrech zahrnuje elektroniku, optiku a fluidiku. Fluidika slouží jako systém pro přívod kapaliny, který směruje vzorek k optickým součástem, jež se skládají z excitační optiky (laser) a sběrné optiky, která se skládá z fotodiod a fotonásobičů (PMT). Důležité je, že elektronické komponenty převádějí informace z detektorů na digitální signály, které jsou interpretovány počítači. Kombinace dalších systémů usnadňují pokročilejší analýzy vzorků, včetně použití buněčných sorterů k čištění a sběru vzorků a zobrazovacích cytometrů, které kombinují průtokovou cytometrii s fluorescenční mikroskopií.