Reagencie a substráty pro imunodetekci

Blokující činidla

Blokování nevázaných membránových míst zabraňuje nespecifické vazbě protilátek, která může vést k vysokému pozadí. Tradiční blokátory na bázi mléka, želatiny a jiných proteinů jsou účinné pro mnoho aplikací blottingu, ale mohou snižovat citlivost nebo detekci maskováním signálu nebo rušením detekce specifických proteinových cílů. Immobilon^® Reagencie pro potlačení šumu blokování obsahují bezbílkovinné pufry připravené k použití, optimalizované pro snížení úrovně pozadí při použití chemiluminiscenční, fluorescenční nebo fosfoproteinové detekce.

Streptavidin a sekundární protilátkové konjugáty

Moderní metody imunodetekce jsou založeny na enzymové detekci pomocí streptavidinu nebo sekundárních protilátek kovalentně vázaných na enzymy, jako je křenová peroxidáza (HRP) nebo alkalická fosfatáza (AP). Konjugovaný enzym katalyzuje degradaci specifických substrátů, což vede ke generování signálu. Pro Western blotting je k dispozici řada konjugátů streptavidinu, proteinu A, proteinu G a sekundárních protilátek. Nabízíme také široký výběr substrátů HRP a AP pro chemiluminiscenční, chromogenní a chemifluorescenční detekci při Western blottingu.

CHEMILUMINESCENTNI SUBSTRATY PRO WESTERN BLOTTING

Immobilon^® HRP substráty pro chemiluminiscenční detekci poskytují zvýšenou citlivost pro kvantitativnější bloty a snižují náklady tím, že umožňují snížit koncentraci protilátky použité pro detekci. Vyberte si z portfolia substrátů Immobilon® s různou citlivostí v pohodlných formátech připravených k použití nebo dvousložkových formátech pro optimalizaci detekce pro vaši aplikaci Western blottingu.

• Chemiluminiscenční substráty Immobilon^® Classico, Crescendo a Forte.zahrnují skupinu předem namíchaných, k použití připravených reagencií pro detekci na bázi peroxidázy nabízených v řadě citlivostí, které poskytují optimální poměr signálu k pozadí ve spektru koncentrací cílových proteinů. Detekční limity:
  • Immobilon^® Classico: ~ 6 pg cílového proteinu
  • Immobilon^® Crescendo:Immobilon^® Forte:  ~ 1-3 pg cílového proteinu
  • Immobilon^®: ~ 400 fg cílového proteinu
     
• Immobilon^® Western HRP, Immobilonsup>® ECL Ultra a Immobilon^® UltraPlus Western substráty poskytují výjimečnou citlivost a dlouhou životnost signálu ve standardních dvousložkových formátech. Tyto formulace umožňují použití více zředěných roztoků primárních protilátek pro detekci imunoblotů. Limity detekce:
  • Immobilon^® Western HRP substrát: ~ 400 fg target protein
  • Immobilon^® ECL Ultra substrate: low femtogram range
  • Immobilon^® ECL UltraPlus Western Blot HRP Substrate:

Relativní citlivost substrátů Immobilon^® Chemiluminiscenční HRP substráty

Cytiva™ Amersham™ ECL detekční činidla používají vylepšenou luminolovou HRP detekci, přičemž jsou k dispozici různé formulace pro pokrytí různých aplikací Western blottingu. 

• Cytiva Amersham™ ECL detekční činidla pro Western blotting se doporučují pro konfirmační aplikace Western blottingu.
• Cytiva Amersham™ ECL Prime Western blotting detekční činidlo umožňuje detekci vysoce i nízce abundantních proteinů na stejném blotu.
• Cytiva Amersham™ ECL Select Western blotting detekční činidla nabízejí vysokou citlivost i při použití zředěných primárních a sekundárních protilátek.
• Cytiva Amersham™ ECL Start Western blotting detekční činidlo bylo vyvinuto pro chemiluminiscenční detekci proteinů se střední a vysokou expresí.

CHROMOGENNÍ SUBSTRÁTY PRO WESTERN BLOTTING

Chromogenní detekce využívá peroxidázu (např, HRP) nebo enzym konjugovaný s alkalickou fosfatázou (AP) ke katalýze reakce, jejímž výsledkem je usazování nerozpustné barevné sraženiny pro detekci. Naše chromogenní substráty pro Western blotting jsou k dispozici ve formě roztoku, prášku a tablet, což poskytuje flexibilní možnosti skladování a použití.

• SIGMAFAST™ DAB tablety (chromogenní substrát HRP).se skládají z kolorimetrického srážecího substrátu, který po reakci s křenovou peroxidázou vytváří hnědou barvu a lze jej rozpustit ve vodě a připravit tak pufrovaný roztok připravený k použití pro detekci blotů.
• BCIP/NBT (modrá/fialová) a BCIP/TNBT (modrá/hnědá) Single Reagent (chromogenní substráty AP) jsou vysoce citlivé kolorimetrické substráty pro alkalickou fosfatázu.
• TMB Enhanced One Component HRP Membrane Substrate (chromogenní HRP substrát) je jednosložkový kolorimetrický substrát, který vytváří tmavě modrý produkt.

Signal Enhancers

• Immobilon^® Signal Enhancer je určen pro použití v aplikacích Western blottingu, kdy je pozorována nízká intenzita signálu. Zesílení reakce protilátka-antigen může vést k 2 až 10násobnému zvýšení intenzity signálu. Immobilon^® Signal Enhancer je kompatibilní s PVDF a nitrocelulózovými membránami a lze jej použít s chromogenními, chemiluminiscenčními a fluorescenčními detekčními metodami.
• Sada pro zesílení imunoreakce SignalBoost™ je určena k zesílení chemiluminiscenčního nebo kolorimetrického signálu cíle na nitrocelulózových nebo PVDF membránách

Reagencie a soupravy pro stripping a re-probing

Reagencie pro stripping a re-probing jsou speciálně vyvinuty pro rychlé a účinné odstranění protilátek z Western blotů bez výrazného ovlivnění imobilizovaných proteinů.

• ReBlot™ Plus činidla účinně odstraňují navázané protilátky ze sondovaných blotů. Reagencie ReBlot™ Plus jsou k dispozici v mírném a silném složení.