Sekundární protilátky
Obrázek 1.Imunofluorescence. Koňská exuberantní granulační tkáň (hrdé maso) obarvená pomocí Anti-von Wille.
Sekundární protilátky jsou polyklonální nebo monoklonální protilátky, které se vážou na primární protilátky nebo jejich fragmenty, jako jsou oblasti Fc nebo Fab. Obvykle jsou označeny sondami, díky nimž jsou užitečné pro detekci, purifikaci nebo třídění.
Nabízíme sekundární protilátky z různých hostitelských druhů. Naše polyklonální sekundární protilátky se vyrábějí ze séra hostitelských zvířat, jako jsou myši, králíci, kozy a ovce. Zatímco naše monoklonální sekundární protilátky jsou vyráběny z myších hybridomových klonů.
Potřebujete pomoci s nalezením správné protilátky pro vaši aplikaci?
Použijte náš Vyhledávací nástroj Antibody Explorer pro zobrazení a porovnání protilátek podle klonality, použití, druhové reaktivity, konjugátu, hostitelského druhu a formy.
Obrázek 2.Fluorescenční mikrofotografie mitotických plicních buněk mloka. Mikrotubuly obarvené monoklonální anti-^.
Obrázek 3.Imunocytochemie. Zmrazený řez optickým nervem potkana obarvený myší Anti-neurofilamentem H a CF568 Kozí Anti-Mouse (neuronální procesy, červeně), králičí Anti-GFAP a CF488A Kozí Anti-Rabbit, vysoce zkřížené (gliové buňky, zeleně). Jádra jsou obarvena pomocí RedDot2 (azurová).
Konjugované protilátky a sondy
Nabízíme široké portfolio konjugovaných protilátek. Konjugovaná protilátka je monoklonální nebo polyklonální protilátka spojená se značkou a používaná k detekci v různých testovacích technikách. Specifická užitečnost sekundární protilátky závisí na konjugované sondě (sondách). Sondy jsou molekuly, které podporují různé detekční technologie. Nejběžnější detekční systémy pro konjugované sekundární protilátky jsou kolorimetrické nebo fluorescenční.
Kolorimetrické testy jsou obvykle založeny na použití alkalické fosfatázy (ALP) nebo křenové peroxidázy (HRP) nebo jejich derivátů. K zesílení kolorimetrického signálu pro ALP nebo HRP se často používá konjugátový vazebný systém biotinu avidinu (streptavidinu). Nejběžnější fluorescenční testy využívají fluorescein-izothiokyanát (FITC), rodamin nebo jeho derivát, tetrametylrhodamin-izothiokyanát (TRITC), kyanin (Cy3) nebo fykoerythrin (R-PE).
Nabízíme konjugované protilátky spojené s různými kolorimetrickými a fluorescenčními značkami pro použití v detekci, purifikaci, třídění a mikroskopických aplikacích. Konjugované protilátky se vyrábějí v různých hostitelských zvířatech, díky čemuž jsou kompatibilní se širokou škálou imunochemických činidel. Pro uživatele, jejichž výzkum vyžaduje značení vlastních činidel, nabízíme soupravy pro značení protilátek, které umožňují konjugaci různých značek (biotin, FITC, CF™ značky) s monoklonálními a polyklonálními protilátkami.
Protein A, G a L
Protein A pochází z Staphylococcus aureus. Protein G pochází z druhu Streptococcus. Oba mají vazebná místa pro Fc část savčího IgG. Afinita těchto proteinů k IgG se liší podle živočišného druhu. Protein G má vyšší afinitu k potkanímu, kozímu, ovčímu a hovězímu IgG, stejně jako k myšímu IgG1 a lidskému IgG3. Protein A má vyšší afinitu k IgG koček a morčat (tabulka 1). Kromě vazebných míst pro Fc IgG obsahuje nativní protein G vazebná místa pro albumin, Fab oblast Igs a membránové vazebné oblasti, což může vést k nespecifickému barvení. Tyto problémy byly řešeny vytvořením rekombinantních forem proteinu. Rekombinantní protein G byl upraven tak, aby byla odstraněna vazebná oblast pro albumin, a rekombinantní protein G′ je zkrácený protein, který postrádá vazebná místa pro albumin, Fab a membránu, přičemž si zachovává vazebné místo pro Fc, takže je specifičtější pro IgG než nativní forma.
Tabulka 1.Vazebné kapacity proteinů A, G a L pro různé druhy.
Protein L z Peptostreptococcus magnus má afinitu k lehkým řetězcům kappa (Tabulka 2) různých druhů. Detekuje monoklonální nebo polyklonální IgG, IgA a IgM a také Fab, F(ab′)2 a rekombinantní jednořetězcové Fv (scFv) fragmenty, které obsahují lehké řetězce kappa. Váže také kuřecí IgG. Poznámka: Druhy jako hovězí, kozí, ovčí a koňský Ig, jejichž Ig obsahují téměř výhradně lambda řetězce, se nebudou dobře vázat na Protein L, pokud vůbec.
Tabulka 2.Vazba proteinu L na různé lehké řetězce imunoglobulinů.
Detekční činidla
Protein A a G se používá jako obecné, druhově nespecifické činidlo pro vazbu primárních protilátek nebo povrchových IgG v savčích tkáních. Protein G se doporučuje pro většinu druhů, včetně myší a potkanů. Protein A se doporučuje pro kočky a morčata. Ani jeden z nich se nedoporučuje pro detekci IgA nebo IgM, pro detekci Fab fragmentů nebo detekci ptačího IgG. Po navázání na pryskyřici, jako je agaróza, lze Protein A a Protein G použít k afinitní purifikaci imunoglobulinů ze séra nebo tekutiny ascitu.
Protein L se používá jako obecné činidlo pro vazbu primárních savčích nebo ptačích protilátek nebo povrchových Ig všech tříd. Zvláště užitečný je pro detekci Fab, F(ab′)2 fragmentů a rekombinantních scFv fragmentů, pro detekci Igs vázaných na Fc receptory nebo pro detekci monoklonálních protilátek v přítomnosti bovinních Igs. Použití je omezeno na detekci Igs nesoucích lehké řetězce kappa.
Reziny
Protein A a protein G mají vazebná místa pro Fc část savčích IgG. Kapacita těchto proteinů pro IgG se liší podle druhu. Obecně mají IgG vyšší afinitu k proteinu G než k proteinu A a protein G může vázat IgG z většího množství druhů. Afinita různých podtříd IgG, zejména myších a lidských, k proteinu A se liší více než k proteinu G. Protein A lze proto použít k přípravě izotypově čistých IgG z některých druhů. Protein L je vhodný k izolaci myších monoklonálních protilátek ze supernatantů buněčných kultur bez kontaminace hovězím IgG.
Obrázek 4.CF™ Dye. HeLa buňky obarvené myším antitubulinem a sekundární protilátkou CF488A Goat Anti-Mouse (mikrotubuly, zeleně). Aktinová filamenta jsou obarvena falloidinem CF640R (fialová). Jádra jsou protibarvena DAPI (modře).
CF™ Dye Labeled Antibodies
Barviva CF™ jsou řadou vysoce ve vodě rozpustných fluorescenčních barviv pokrývajících viditelné a blízké infračervené (near-IR) spektrum pro značení protilátek. Barviva CF™ byla vyvinuta vědci za použití průlomových chemických postupů a díky racionálnímu návrhu barviv se jejich jas, fotostabilita a výběr barev vyrovnají kvalitě jiných komerčních barviv.
Nabízíme vysoce validované sekundární protilátky značené barvivy CF™ v různých druhově specifických variantách.
Abyste mohli pokračovat ve čtení, přihlaste se nebo vytvořte účet.
Nemáte účet?