Testy aktivity enzymů
Obrázek 1. Znázornění procesu stanovení enzymatické aktivity, který začíná s donorem fluorescence a zhášejícím akceptorem na substrátu, prochází enzymatickým štěpením za účelem odstranění zhášedla a ukazuje zvýšení fluorescenční aktivity, což signalizuje, že dochází k enzymové aktivitě.
Enzymatické testy aktivity jsou převážně prováděny výzkumnými pracovníky za účelem zjištění přítomnosti nebo množství určitého enzymu v organismu, tkáni nebo vzorku. Příklady takových enzymů zahrnují α-amylázu, katalázu, lakázu, peroxidázu, lysozym a reportérové enzymy alkalickou fosfatázu a luciferázu. K dispozici jsou různá činidla a metodiky, které umožňují zkoumat specifické interakce enzymů se substráty. Výběr vhodného řešení pracovního postupu závisí na citlivosti, kterou výzkumník požaduje. Kolorimetrické roztoky jsou užitečné pro detekci, zatímco činidla založená na fluorescenci jsou vhodnější pro kvantifikaci aktivity enzymů.
Doporučené kategorie
Zdroje pro disociaci tkání a oddělování buněk, protokoly a komplexní nabídka spolehlivých a rozsáhle charakterizovaných enzymů, včetně trypsinu, kolagenázy, papainu, nukleáz (DNázy a RNázy), hyaluronidázy, elastázy a proteázy XIV.
Substráty a enzymy mají zásadní význam pro výzkum v oblasti přírodních věd, a to jak jako nástroje, tak jako cíle detekčních systémů. Objevte enzymové systémy detekce proteinů pro ELISA, imunohistochemii, western blotting a mnoho dalších s naším rozmanitým portfoliem detekčních substrátů a enzymů.
Enzymy pro analýzu léčiv, včetně β-glukuronidázy (beta-glukuronidázy) a sulfatázy pro studie metabolismu léčiv a screening léčiv
Naše portfolio vysoce kvalitních koenzymů spolehlivě usnadňuje funkci enzymů a katalyzuje reakce pro vaše výzkumné aplikace
.Stanovení optimálních podmínek pro enzymovou aktivitu
Ačkoli je v literatuře popsáno mnoho enzymových testů, je nutné tyto postupy upravit podle jedinečných požadavků zkoumaného enzymu. Specifická aktivita enzymu závisí na mnoha faktorech, včetně pH, teploty, iontové síly a koncentrace všech složek v testu. Za takových podmínek, jako je pH, se aktivita enzymu často podobá zvonové křivce. Nejvyšší aktivita při určitém pH se uvádí jako Vmax, přičemž na obou koncích křivky je pozorována klesající aktivita. Některé enzymy mohou vyžadovat dodatečné zohlednění sloučenin, které se reakce přímo neúčastní, jako jsou ionty kovů, detergenty a hydrofobní molekuly.
Stanovení optimálních podmínek pro enzymovou aktivitu
Ačkoli je v literatuře popsáno mnoho enzymových testů, je nutné tyto postupy upravit podle jedinečných požadavků zkoumaného enzymu. Specifická aktivita enzymu závisí na mnoha faktorech, včetně pH, teploty, iontové síly a koncentrace všech složek v testu. Za takových podmínek, jako je pH, se aktivita enzymu často podobá zvonové křivce. Nejvyšší aktivita při určitém pH se uvádí jako Vmax, přičemž na obou koncích křivky je pozorována klesající aktivita. Některé enzymy mohou vyžadovat dodatečné zohlednění sloučenin, které se reakce přímo neúčastní, jako jsou ionty kovů, detergenty a hydrofobní molekuly.
Součásti enzymového testu
Pro mnoho enzymů je standardním rozpouštědlem voda, protože se jedná o stejné vodní prostředí, jaké se nachází v buňkách. Organická rozpouštědla se však používají v některých případech, kdy jsou enzymy nebo enzymové složky ve vodě nerozpustné. Kromě toho jsou rozhodujícími složkami při zkoušce enzymové aktivity také substráty a kofaktory, katalýza pro enzymatické reakce. Substráty a kofaktory se často identifikují na základě jejich funkcí za fyziologických podmínek. Substráty a kofaktory se proto široce vzájemně ovlivňují a mohou být vyžadovány různými enzymy. Dalšími kritickými prvky, které je třeba vzít v úvahu, jsou pufry a ionty, protože jsou nezbytné pro stabilizaci pH v průběhu testu a přímo ovlivňují aktivitu enzymu. Například mono- nebo dvojmocné kovové ionty mohou být vyžadovány pro katalytickou aktivitu kofaktorů v reakci a jsou nezbytné pro aktivitu enzymu.
Provedení enzymové zkoušky
Příprava komponent enzymové zkoušky je prvním praktickým krokem. Obecně je výhodné připravit velkou testovací směs s výjimkou jedné aktivační složky, aby se předešlo chybě pipetování, která je vlastní pipetování malých objemů. Jakmile je testovací směs připravena, přidají výzkumní pracovníci do směsi poslední aktivační složku, aby zahájili test aktivity. Předběžná úprava enzymu skladováním při nízkých teplotách a časté přidávání různých chemických nebo proteinových přísad jsou rozhodujícími faktory pro zajištění stability enzymu a maximální aktivity před zahájením testu. Jakmile se reakční materiály spojí v pozorovací nádobě, měly by se všechny složky při zahájení reakce rychle a důkladně promíchat. Záznam dat by měl být zahájen ihned po smíchání a detekovatelný signál z testu by měl být vykreslen pro celý časový průběh reakce.
Vyhledejte v našem vyhledávači dokumentů datové listy, certifikáty a technickou dokumentaci.
Související články
- Explore compound library screening options with our Pharmacologically Active Compounds portfolio.
- Esterifikace cholesterolu zvyšuje účinnost transportu v lipoproteinech a zvyšuje tak jejich transport v krevním řečišti.
- Úplný seznam čísel Komise pro enzymy pro výzkum metabolismu.
- Světluška luciferáza je citlivým reportérem pro genové studie, protože se v savčích buňkách nebo tkáních nevyskytuje.
- Cathepsin B is a lysosomal cysteine proteinase with broad specificity. This protocol uses Nα–CBZ–Arg–Arg–7–amido–4–methylcoumarin as the substrate for fluorometric detection of Cathepsin B activity.
- Zobrazit vše (34)
Související protokoly
- Cathepsin B is a lysosomal cysteine proteinase with broad specificity. This protocol uses Nα–CBZ–Arg–Arg–7–amido–4–methylcoumarin as the substrate for fluorometric detection of Cathepsin B activity.
- Tato stránka poskytuje informace o různých pull-down testech pro další izolaci multiproteinových komplexů za účelem identifikace jejich složek pomocí produktů společnosti Cytiva.
- Follow our procedure for the determination of alpha-Amylase activity. This enzymatic assay of a-Amylase guides you through the entire process and necessary calculations.
- This procedure may be used for all Catalase products.
- Pro měření aktivity hyaluronidázy se používá turbidimetrické stanovení při vlnové délce 600 nm. Jedna jednotka aktivity hyaluronidázy způsobí změnu absorbance o 0,330 za minutu při pH 5,35 a 37 °C.
- Zobrazit vše (84)
Další články a protokoly
Jak vám můžeme pomoci
V případě jakýchkoli dotazů odešlete žádost o zákaznickou podporu
nebo se obraťte na náš tým zákaznického servisu:
Pište [email protected]
nebo volejte na +1 (800) 244-1173
Další podpora
- Chromatogram Search
Use the Chromatogram Search to identify unknown compounds in your sample.
- Kalkulačky a aplikace
Web Toolbox - vědecké výzkumné nástroje a zdroje pro analytickou chemii, vědu o živé přírodě, chemickou syntézu a materiálovou vědu.
- Customer Support Request
Zákaznická podpora včetně pomoci s objednávkami, produkty, účty a technickými problémy s webovými stránkami.
- FAQ
Explore our Frequently Asked Questions for answers to commonly asked questions about our products and services.
Abyste mohli pokračovat ve čtení, přihlaste se nebo vytvořte účet.
Nemáte účet?