Cytologie a cytodiagnostika
Cytologie je studium struktury a funkce buněk, zatímco cytodiagnostika je použití cytologie jako diagnostického nástroje. Cytodiagnostika se opírá o zavedená, vysoce specifická barvení a protokoly, které usnadňují identifikaci abnormalit v buňkách pomocí mikroskopie. V lidské cytodiagnostice existují dvě oblasti cytologie (gynekologická a negynekologická), ve kterých se vzorky vyšetřují na přítomnost maligních a premaligních buněk.
Související technické články
- Studujte metastázy nádorů pomocí různých testů migrace a invaze, jako je test Boydenovy komory, Millicell® µ-Migration Assay a scratch assay.
- Cellular apoptosis assays to detect programmed cell death using Annexin V, Caspase and TUNEL DNA fragmentation assays.
- For good cell attachment the hydrophobic polystyrene surface must be modified to a more hydrophilic surface. This allows cell attachment proteins (vitronectin and fibronectin) found in the serum containing culture medium to adhere and spread on the vessel bottom providing a better surface for cells to attach
- For microbiologists the most fundamental stain was developed in 1884 by the Danish bacteriologist Hans Christian Gram.
- Přehled primárních buněk a použití médií v biomedicínských kultivačních aplikacích zdůrazňuje rozdíly oproti buněčným liniím.
- Zobrazit vše (10)
Související protokoly
- Protokol o stanovení pro kolorimetrickou detekci hydroxyprolinu v biologických vzorcích pomocí soupravy pro stanovení hydroxypolinu.
- Trypsin se běžně používá k oddělování adherentních buněk od povrchu. K dispozici je široká škála trypsinových roztoků, které splňují vaše specifické požadavky na buněčné linie.
- Pro přípravu Percollova gradientu je třeba osmolalitu Percollu upravit fyziologickým roztokem nebo médiem pro buněčné kultury, aby byl Percoll izotonický s fyziologickými roztoky solí.
- Protokol buněčných kultur pro pasážování a dělení adherentních buněčných linií pomocí trypsinu EDTA. Příručka ECACC ke stažení zdarma.
- Zobrazit vše (11)
Další články a protokoly
Cytologický odběr
Při cytodiagnostice jsou buňky odebrány z tkáňové masy nebo tekutiny a přeneseny na cytologické sklíčko, obarveny, vyšetřeny a vyhodnoceny. Architektura původní tkáně se stává nerozpoznatelnou a nemůže pomoci v procesu hodnocení. Vzorkový materiál, jako je sputum, moč, výpotky z tělních dutin a výplachový materiál, se odstředí a sediment se následně rozetře na mikroskopické sklíčko. Materiál z aspirační biopsie (FNAB) z prsu, štítné žlázy, lymfatických uzlin, prostaty, mozkomíšního moku a dalších lokalit se pečlivě rozetře na sklíčka s asistencí obrazu nebo prostou aspirací tenkou jehlou. V závislosti na barvicí metodě se rozetřené vzorky buď ihned fixují (Papanicolaouovo barvení), nebo se před hematologickým či jiným barvením důkladně vysuší na vzduchu.
Fixace pro cytologii
Předpokladem přesné cytologické diagnostiky je dokonalá fixace vzorku. Vzorky musí být fixovány ihned po odběru, aby se zabránilo vysychání a smršťování buněk. Okamžitá fixace zachovává strukturální vlastnosti vzorku pro jasné barvení a diferenciaci. Artefakty při barvení mohou narušit diagnózu, pokud jsou vzorky fixovány příliš pozdě. Klasickou metodou fixace je ponoření mikroskopického preparátu na 30 minut do 96% ethanolu. Účinnějším způsobem je fixace buněk fixativem ve spreji. Fixativa ve spreji jsou vodné alkoholové roztoky obsahující polyethylenglykol (PEG). Jsou vhodné pro všechny typy cytologických materiálů barvených Papanicolaouovou metodou.
Metody barvení pro cytodiagnostiku
Výběr barvení do značné míry závisí jak na původu vzorku, tak na zkušenostech a preferencích vyšetřujícího. Například Papanicolaouova technika barvení se používá nejen pro gynekologické stěry, jako jsou PAP stěry, ale rutinně se používá i pro negynekologický materiál, jako je sputum, mozkomíšní mok, synoviální tekutina a moč. Barvení Giemsou se běžně používá pro vzorky FNAB z lymfatických uzlin. Pappenheimovo barvení se používá pro močové sedimenty, výpotky, materiál z bronchiální laváže a materiál FNAB z různých lokalit (např. prsu, štítné žlázy, mozkomíšního moku). Wrightovo barvení je hematologické barvení, které lze použít k rozlišení typů krevních buněk. Obarvené buňky se připraví k mikroskopování pomocí standardní dehydratace alkoholem/xylenem, čištění a montáže. Kromě manuálních metod barvení lze k přípravě velkého počtu vzorků použít mechanické a automatické barvicí systémy. Ke screeningu lze pak použít plně automatizovaný vyhodnocovací systém, v němž se vyhodnotí obarvené vzorky, označí se abnormální buňky nebo skupiny buněk a snímky se uloží do galerie pro vyhledání a další zkoumání.
Cytodiagnostická interpretace
Mikroskopické vyšetření materiálu lze provést okamžitě v závislosti na použité fixaci, přípravě a barvicích technikách. Díky této vlastnosti je cytodiagnostika vhodná pro velkoobjemová vyšetření, jako je například cervikální screening. Jedním z kritických bodů cytodiagnostiky je skutečnost, že výsledky cytologických vyšetření se přímo vztahují k místu, ze kterého byl vzorek odebrán. V zájmu efektivity musí být techniky odběru a přípravy vzorků důkladně zvládnuty a kontrolovány. Při každé aplikaci by měly být použity vhodné kontroly, aby se předešlo nesprávnému výsledku.
Úspěšnost a účinnost diagnostické cytologie se měří její schopností odhalit časné změny stavu onemocnění (senzitivita) a současně zabránit falešně pozitivním diagnózám (specificita). Citlivost a specifičnost závisí na správném odběru, fixaci, barvení a interpretaci vzorku. Vedle zobrazovacích technik, jako je rentgenové vyšetření, počítačová tomografie (CT), ultrazvuk, nukleární spinová tomografie a pozitronová emisní tomografie (PET), je cytologie nepostradatelnou součástí diagnostiky.
Abyste mohli pokračovat ve čtení, přihlaste se nebo vytvořte účet.
Nemáte účet?