Testy buněčné migrace a invaze

The Boyden Chamber Assay
Cell Migration Assays
Cell Invasion Assays
Microfluidic Migration Device
Mikrofluidní migrační zařízení
In Vitro Scratch Assay
Proteiny ECM
Reference

Metastázy jsou kumulativním výsledkem mnohočetných změn v nádorové buňky a jejich mikroprostředí, které umožňuje buněčnou migraci a invazi do zdravé hostitelské tkáně. Když se proliferující neoplastické buňky snaží uniknout z místa primárního nádoru, musí dojít k lokální adhezi buněk a invazi do okolní tkáně¹. Než proniknou endotelem cév a získají přístup do krevního řečiště, musí nádorové buňky proniknout do místních tkání degradací bílkovinných složek ECM a nakonec překonat bazální membránu². Jakmile se tyto buňky dostanou do oběhu, mohou vytvářet metastatické kolonie na sekundárních místech.

Obrázek 1. Metastazování nádorů je vícestupňový proces zahrnující adhezi nádorových buněk, jejich migraci a invazi do sousedních tkání a cév.

The Boyden Chamber Assay

Nejrozšířenější technikou buněčné migrace je Boyden Chamber Assay³. Klasický systém transwellových migračních testů využívá dutou plastovou komůrku, která je na jednom konci uzavřena porézní membránou. Tato komůrka je zavěšena nad větší jamkou, která může obsahovat médium a/nebo chemoatraktanty. Buňky se umístí dovnitř komory a nechají se migrovat přes póry na druhou stranu membrány. Migrující buňky se poté obarví a spočítají.

Obrázek 2. Protokol o zkoušce v Boydenově komoře. Buňky mohou migrovat přes buněčnou monovrstvu nebo směs proteinů ECM, které byly nasazeny na polopropustnou membránovou vložku buněčné kultury s chemoatraktanty přidanými pod membránu. Migrované buňky lze poté kvantifikovat obarvením buněk barvivy DNA, jako jsou Calcein-AM nebo CyQUANT GR Dyes.

Sady pro buněčnou migraci a invazi

Sada QCM™ společnosti Millipore. pro buněčnou migraci a invazi poskytují rychlý a účinný systém pro kvantitativní stanovení různých faktorů ovlivňujících buněčnou migraci, adhezi a invazi, včetně screeningu farmakologických látek, hodnocení integrinů, chemoatraktantů nebo jiných adhezních receptorů zodpovědných za buněčnou migraci. Tyto soupravy poskytují výzkumníkům konzistentní výsledky již více než deset let a byly publikovány ve více než 4000 publikacích.

Buněčné migrační testy: Umožňuje pohodlnou a citlivou kvantifikaci in vitro migrace buněk směrem k chemickému koncentračnímu gradientu (chemotaxe) nebo gradientu proteinů ECM (haptotaxe).

Buněčné invazivní testy: Umožňují pohodlnou a citlivou kvantifikaci in vitro buněčné invaze přes bazální membránu s proteinem ECM nebo vrstvu buněk, jako jsou endotelové buňky.

Jak vybrat vhodnou velikost pórů pro vaše buňky:

• 3 μm velikost pórů je vhodná pro migraci leukocytů nebo lymfocytů.
• 5 μm velikost pórů je vhodná pro podskupinu fibroblastových buněk nebo nádorových buněk, jako jsou buňky NIH-3T3 a MDA-MAB 231.
• Výběr velikosti pórů je možný pouze v případě, že buňka proniká do buňky. Vhodná také pro monocyty a makrofágy.
• Velikost pórů 8 μm je vhodná pro většinu typů buněk. Tato velikost pórů podporuje optimální migraci většiny epiteliálních a fibroblastových buněk. Poznámka - velikost pórů 8 μm není vhodná pro experimenty s migrací lymfocytů.

Cell Migration Assays

Popis	Velikost póru	Formát desky	Povlak ECM	Detekce	Č. Testů	Číslo produktu
Chemotaxis Cell Migration Assays	8 µm	24 jamek
Chemotaxis Cell Migration Assays
Chemotaxis Mill.br>	Žádné	Kolorimetrické	24	ECM508
		24 jamek		Fluorometrický	24	ECM509
		96 jamek		Fluorometrický	96	ECM510
	5 µm	24 jamek		Kolorimetrický	24	ECM506
		24 jamek		Fluorometrický	24	ECM507
		96jamkový		Fluorometrický	96	ECM512
	3µm	24 jamek		Kolorimetrický	24	ECM504
		24-jamkový		Fluorometrický	24	ECM505
		96jamkový		Fluorometrické	96	ECM515
Haptotaxové testy buněčné migrace	8 µm	24 jamek	Fibronektin	Kolorimetrické	24	ECM580
		24 jamek	Kolagen I	Fluorometrický	24	ECM582
	5 μm	24 jamek	Laminin	Kolorimetrický	24	ECM220
		24-jamkový		Fluorometrický	24	ECM221

 Cell Invasion Assays

Popis	Velikost póru	Formát desky	Povlak ECM	Detekce	Č. Testů	Číslo produktu
Testy invaze do buněk	8 µm	24jamkové	ECMatrix™	Kolorimetrické	12	ECM550
		24jamkový		Kolorimetrický	24	ECM554
		96-jamkový		Kolorimetrický	96	ECM555
		24 jamek	Kollagen I	Kolorimetrický	24	ECM551
		24 jamek		Fluorometrický	24	ECM552
		96-well		Fluorometric	96	ECM556
Migrační testy endoteliálních buněk	3 µm	24 jamek	Fibronektin	Kolorimetrické	24	ECM200
		24 jamek		Fluorometrické	24	ECM201
Endoteliální buněčné invazivní testy		24 jamek	ECMatrix™	Kolorimetrické	24	ECM210
		24-jamkový			Fluorometrické	24	ECM211
3 µm	24-jamková	Kolorimetrický	24	ECM557
Transendoteliální migrace nádorových buněk	8 µm	24 jamek		Kolorimetrické	24	ECM558
QCM™ Test degradace želatiny v invadopodiu (zelený)	NA	NA	FITC-Gelatin*	Fluorometric	32	ECM670
QCM™ Invadopodia Gelatin Degradation Assay (Red)			Cy3-Gelatin*	Fluorometrický	32	ECM671

Mikrofluidní migrační zařízení

Souprava pro mikromigrační testy Millicell^® µ-Migration Assay Kit překonává omezení tradičních vícejamkových migračních testů. Inovativní konstrukce sklíčka µ-Migration Slide podporuje stabilní koncentrační gradient generovaný difuzí, který je konzistentně lineární a trvá déle než 48 hodin. Sklíčko µ-Migration Slide je vyrobeno z plastu s vysokými optickými vlastnostmi podobnými vlastnostem skla a je speciálně navrženo pro video mikroskopické testy. V určitých časových intervalech lze pořizovat snímky pozorovací oblasti, což umožňuje sledování a kvantitativní měření migrace buněk v reálném čase.

Obrázek 3. Migrace buněk HT1080 v přímém přenosu. Vliv koncentrace séra (0 % nebo 10 %) na sklon buněk HT1080 k migraci na povrchu pokrytém kolagenem. Výsledky ukazují, že většina buněk směřuje svou migraci k 10% gradientu FCS (černá barva).

In Vitro Scratch Assay

Scratch Assay je oblíbená metoda pro studium migrace buněk⁴. Rozšíření této techniky se však ukázalo jako náročné, což ztěžuje biochemickou analýzu molekulárních dějů zprostředkujících opravu rány. Test poškrábání Cell Comb™ řeší potřebu jednoduchého nástroje, který by dokázal vytvářet vícenásobné poškrábání ran s vyšší výkonností.

Přečtěte si naši aplikační poznámku v časopise Nature

Číslo výrobku	Popis výrobku
17-10191	Cell Comb™ Scratch Assay

Obrázek 4. Pomocí testu škrábání CellComb byly monovrstvy buněk NIH3T3 poškrábány/poraněny jednosměrně (vlevo) nebo obousměrně (vpravo). V průběhu času migrující buňky vyplní poškrábané úseky a kvantifikují se pomocí jednoduchého počítání buněk. Pomocí testu migrace po škrábnutí je možné také zobrazovat migrující buňky v přímém přenosu.

Bílkoviny ECM

Bílkoviny extracelulární matrix (ECM) jsou produkovány intracelulárně a následně vylučovány do okolního buněčného prostředí, přičemž aktivně regulují rozmanitou škálu buněčných funkcí včetně buněčné adheze, diferenciace, proliferace, migrace, invaze a přežití. Hlavním účelem ECM v kulturách in vitro je podpora buněčné adheze při zachování životaschopnosti buněk a maximalizace jejich proliferace pro následné buněčné aplikace.

• Kollagen
• Laminin
• Fibronektin
• Vitronektin
• Elastin
• Extrakt z bazální membrány

Odkazy

1. Friedl P, Alexander S. 2011. Cancer Invasion and the Microenvironment: Plasticity and Reciprocity. Cell. 147(5):992-1009. https://doi.org/10.1016/j.cell.2011.11.016

2. Lu P, Takai K, Weaver VM, Werb Z. 2011. Extracellular Matrix Degradation and Remodeling in Development and Disease. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 3(12):a005058-a005058. https://doi.org/10.1101/cshperspect.a005058

3. Chen H. Boyden Chamber Assay.015-022. https://doi.org/10.1385/1-59259-860-9:015

4. Liang C, Park AY, Guan J. 2007. In vitro scratch assay: a convenient and inexpensive method for analysis of cell migration in vitro. Nat Protoc. 2(2):329-333. https://doi.org/10.1038/nprot.2007.30