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Merck

MAK308

Sigma-Aldrich

Phosphat-Assay-Kit

sufficient for 500 colorimetric tests

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About This Item

UNSPSC-Code:
12161503
NACRES:
NA.84

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Verwendung

sufficient for 500 colorimetric tests

Nachweisverfahren

colorimetric

Relevante Krankheit(en)

gastrointestinal diseases; cardiovascular diseases

Lagertemp.

2-8°C

Allgemeine Beschreibung

Phosphat ist einer der am häufigsten vorkommende Mineralstoffe im menschlichen Körper mit einem Anteil von 1 % des Körpergewichts. Die für die Phosphathomöostase bedeutsamsten Hormone sind Parathormon (PTH), Calcitriol und Phosphatonine. Die Aufrechterhaltung der Phosphathomöostase ist für verschiedene biologische Prozesse sehr wichtig, u. a. für den Energiestoffwechsel, die Zellsignalisierung, die Regulation der Proteinsynthese sowie die Skelettentwicklung und Knochenintegrität.[1] Ein ausreichender Phosphatspiegel ist wichtig für den Prozess der Apoptose von reifen Chondrozyten in der Epiphysenfuge. Ein Phosphatmangel wurde mit der Knochenpathologie und klinischen Erkrankungen in Verbindung gebracht.[1]

Anwendung

Dieses Kit kann für die Messung der Freisetzung von ungebundenem Orthophosphat in folgenden Anwendungen eingesetzt werden:
  • Phosphatase-Assays: Freisetzung von Phosphat aus Peptid-, Protein- oder Kleinmolekülsubstrat.
  • Lipase-Assays: Freisetzung von Phosphat aus Phospholipiden
  • Nukleosid-Triphosphatse-Assays: Freisetzung von Phosphat aus Nukleosid-Triphosphaten (ATP, GTP, TTP, CTP etc).
  • Quantifizierung des Phosphats in Phospholipiden, Proteinen und DNA etc.
  • Arzneimittelforschung: Hochdurchsatz-Screening auf Phosphatasehemmer.

Leistungsmerkmale und Vorteile

Sehr stabiles Reagens: Durch unsere innovative Formulierung tritt keine Reagensausfällung ein. Daher ist vor Assays keine Filtration erforderlich, so wie es bei anderen im Handel erhältlichen Kits oft der Fall ist.

  • Hohe Sensitivität und breiter Erfassungsbereich: Nachweis von so geringen Mengen wie 20 pmol Phosphat und ein nutzbarer Bereich von 0,4–50 µmol/l Phosphat.
  • Schnell und praktisch: Der homogene “Mix-and-measure”-Assay ermöglicht die Quantifizierung von freiem Phosphat in 30 Minuten.
  • Mit gängigen Labor- und HTS-Formaten kompatibel: Die Assays können in Röhrchen, Küvetten oder Mikrotiterplatten auf Spektrophotometern und Plattenlesern durchgeführt werden.
  • Robust und für HTS geeignet: Z-Faktoren von 0,7–0,9 werden in 96-Well-Platten beobachtet. Lässt sich leicht für eine automatisierte Handhabung von Flüssigkeiten auf HTS-Systemen automatisieren.

Eignung

Geeignet für die Phosphatbestimmung in Enzymreaktionen mit Freisetzung von ungebundenem Phosphat.

Prinzip

Das Phosphat-Assay-Kit basiert auf einer proprietären Formulierung von Malachitgrün-Farbstoff. Das Kit-Reagenz bildet einen blauen Komplex mit ungebundenem Orthophosphat. Die schnelle Färbung der Reaktion lässt sich leicht mit einem Spektrophotometer (600 - 660 nm) oder einem Plattenlesegerät messen. Die nicht-radioaktiven kolorimetrischen Assay-Kits wurden optimiert und zeichnen sich durch eine überragende Sensitivität und lange Haltbarkeit aus. Der schnell und einfach durchzuführende Assay erfordert nur einen Schritt für die Phosphatbestimmung. Die Assays können in Röhrchen, Küvetten oder Multiwell-Platten durchgeführt werden. Für das einen hohen Durchsatz erfordernde Screening auf Enzymhemmer können die Assays in 96-Well-Platten durchgeführt werden.

Piktogramme

Corrosion

Signalwort

Warning

H-Sätze

P-Sätze

Gefahreneinstufungen

Met. Corr. 1

Lagerklassenschlüssel

8B - Non-combustible corrosive hazardous materials

WGK

WGK 1

Flammpunkt (°F)

Not applicable

Flammpunkt (°C)

Not applicable


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Ana Correia-Branco et al.
International journal of molecular sciences, 21(15) (2020-07-30)
Inorganic phosphate (Pi) is an essential nutrient that fulfills critical roles in human health. It enables skeletal ossification, supports cellular structure and organelle function, and serves key biochemical roles in energetics and molecular signaling. Pi homeostasis is modulated through diet
Kaixi Zhang et al.
ACS applied bio materials, 4(5), 3749-3761 (2022-01-11)
Antimicrobial resistance is a global threat. In addition to the emergence of resistance to last resort drugs, bacteria escape antibiotics killing by forming complex biofilms. Strategies to tackle antibiotic resistance as well as biofilms are urgently needed. Wall teichoic acid
Phosphate homeostasis and its role in bone health.
Penido M G M and Alon U S
Pediatric Nephrology (Berlin), 27(11), 2039-2048 (2012)
Marco Giovannetti et al.
PLoS genetics, 15(12), e1008126-e1008126 (2019-12-20)
Phosphate represents a major limiting factor for plant productivity. Plants have evolved different solutions to adapt to phosphate limitation ranging from a profound tuning of their root system architecture and metabolic profile to the evolution of widespread mutualistic interactions. Here
Tyler M Weaver et al.
Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 117(41), 25494-25504 (2020-10-02)
During DNA replication, replicative DNA polymerases may encounter DNA lesions, which can stall replication forks. One way to prevent replication fork stalling is through the recruitment of specialized translesion synthesis (TLS) polymerases that have evolved to incorporate nucleotides opposite DNA

Questions

1–4 of 4 Questions  
  1. Can this assay be used to measure phosphate from Tyrosine phosphorylated proteins? I have SH2 domain proteins, which binds to pY-proteins. I want to measure the amount of phosphate in each SH2 sample before phosphopeptide enrichment and MS-analysis

    1 answer
    1. There is no guarantee that this assay will detect phosphate covalently bound to a protein. It is possible that the acidic conditions of the working reagent will free the bound phosphate and detect it, but this has not been tested. This assay has a lower limit of detection of 0.4 uM free phosphate.

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  2. How is shipping temperature determined? And how is it related to the product storage temperature?

    1 answer
    1. Products may be shipped at a different temperature than the recommended long-term storage temperature. If the product quality is sensitive to short-term exposure to conditions other than the recommended long-term storage, it will be shipped on wet or dry-ice. If the product quality is NOT affected by short-term exposure to conditions other than the recommended long-term storage, it will be shipped at ambient temperature. As shipping routes are configured for minimum transit times, shipping at ambient temperature helps control shipping costs for our customers. For more information, please refer to the Storage and Transport Conditions document: https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/documents/316/622/storage-transport-conditions-mk.pdf

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  3. How can I determine the shelf life / expiration / retest date of this product?

    1 answer
    1. If this product has an expiration or retest date, it will be shown on the Certificate of Analysis (COA, CofA). If there is no retest or expiration date listed on the product's COA, we do not have suitable stability data to determine a shelf life. For these products, the only date on the COA will be the release date; a retest, expiration, or use-by-date will not be displayed.
      For all products, we recommend handling per defined conditions as printed in our product literature and website product descriptions. We recommend that products should be routinely inspected by customers to ensure they perform as expected.
      For products without retest or expiration dates, our standard warranty of 1 year from the date of shipment is applicable.
      For more information, please refer to the Product Dating Information document: https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/documents/449/386/product-dating-information-mk.pdf

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  4. What is the recommended method for preparing tissue and cell samples for use with the MAK308-1KT Phosphate Assay Kit? Should detergent or another solution be used for these samples?

    1 answer
    1. Utilizing mechanical lysis over detergent-mediated lysis whenever feasible. This is particularly crucial in this instance as detergents could lead to undesired phosphate contamination. They suggest employing a Dounce Homogenizer or sonication. Additionally, the extent of tissue and/or cell lysis can be visually verified using a microscope, if accessible.

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