Trypsin is active but autoproteolyze over time. It requires re-purification and design to reduce autoproteolysis.
T0303
Trypsine from porcine pancreas
Trypsin from porcine pancreas
Type IX-S, lyophilized powder, 13,000-20,000 BAEE units/mg protein
Synonyme(s) :
Serine Protease 1
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About This Item
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Produits recommandés
Type
Type IX-S
Forme
lyophilized powder
Activité spécifique
13,000-20,000 BAEE units/mg protein
Poids mol.
23.8 kDa
Application(s)
diagnostic assay manufacturing
Activité étrangère
chymotrypsin ≤1.0 units/mg protein
Température de stockage
−20°C
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Application
Pour la digestion trypsique des peptides, utiliser un rapport trypsine:peptide d'environ 1:100 à 1:20. La trypsine sert généralement à détacher les cellules adhérentes d'une surface de culture. La concentration qui permet de déloger les cellules de leur substrat dépend principalement du type de cellules et de l'âge de la culture. La trypsine a également été utilisée pour remettre des cellules en suspension lors de cultures cellulaires, pour digérer des protéines en recherche protéomique ou pour réaliser diverses digestions sur gel†. Parmi ses autres applications, citons l'analyse de la cristallisation par des techniques à membrane ou une étude visant à établir que le taux de repliement et le rendement des protéines peuvent être limités par la présence de pièges cinétiques.
Actions biochimiques/physiologiques
La trypsine clive les peptides situés du côté C-terminal des résidus lysine et arginine. Cette réaction d'hydrolyse est plus lente lorsqu'un résidu acide se situe d'un côté ou de l'autre du site de clivage, et elle s'interrompt lorsqu'un résidu proline se situe du côté carboxyle du site de clivage. L'activité de la trypsine est optimale à un pH de 7 à 9. La trypsine peut également cliver les liaisons ester et amide de dérivés d'acides aminés de synthèse. On ajoute de l'EDTA aux solutions de trypsine pour servir d'agent chélateur afin de neutraliser les ions calcium et magnésium qui masquent les liaisons peptidiques sur lesquelles la trypsine agit. L'élimination de ces ions augmente l'activité enzymatique.
Les inhibiteurs de protéases à sérine (entre autres, le DFP, la TLCK, l'APMSF, l'AEBSEF et l'aprotinine) inhibent la trypsine.
Les inhibiteurs de protéases à sérine (entre autres, le DFP, la TLCK, l'APMSF, l'AEBSEF et l'aprotinine) inhibent la trypsine.
Composants
La trypsine comprend un polypeptide monocaténaire de 223 résidus d'acides aminés obtenu par clivage de l'hexapeptide N-terminal du trypsinogène au niveau de la liaison peptidique Lys-lle. Sa séquence d'acides aminés est stabilisée par 6 ponts disulfure. Il s'agit de la forme native de la trypsine : la bêta-trypsine. La bêta-trypsine peut subir une autolyse, par clivage au niveau des résidus Lys-Ser, produisant l'alpha-trypsine. La trypsine fait partie de la famille des protéases à sérine.
Attention
Les solutions préparées dans du chlorure d'hydrogène 1 mM sont stables pendant un an lorsqu'elles sont conservées en aliquotes à -20 °C. De plus, la présence de Ca2+ limite l'autolyse de la trypsine et assure sa stabilité en solution. On notera par ailleurs que la trypsine conserve l'essentiel de son activité dans l'urée 2,0 M, le chlorhydrate de guanidine 2,0 M ou le SDS à 0,1 % (p/v).
Définition de l'unité
Une unité de BAEE produit une ΔA253 de 0,001 par minute à pH 7,6 et à 25 °C lorsque le BAEE est utilisé comme substrat. 1 unité de BTEE = 320 unités d'ATEE. Volume réactionnel = 3,2 ml (trajet optique de 1 cm).
Notes préparatoires
Ce produit est une poudre lyophilisée soluble dans de la solution saline équilibrée de Hank à raison de 25 mg/ml.
Inhibiteur
Réf. du produit
Description
Tarif
Substrat
Réf. du produit
Description
Tarif
Mention d'avertissement
Danger
Mentions de danger
Conseils de prudence
Classification des risques
Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
Organes cibles
Respiratory system
Code de la classe de stockage
11 - Combustible Solids
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 1
Équipement de protection individuelle
dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves
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Protocoles
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