Epigenética

Modificação de histonas

A cromatina é o complexo de DNA genômico e proteínas associadas no núcleo. Modificações na estrutura da cromatina e as interações entre as proteínas da cromatina desempenham um papel direto na regulação epigenética. A estrutura da cromatina é modulada por histonas, uma classe importante de proteínas da cromatina. As histonas formam o nucleossomo, um complexo contendo 2 subunidades cada de histonas H2A, H2B, H3 e H4. Do lado de fora do complexo central, a histona H1 ligante ocupa o DNA internucleossômico. Este complexo com o nucleossomo mantém a estrutura compactada da cromatina. Modificações de histonas em sítios específicos, como metilação, acetilação, fosforilação, ubiquitinação e citrulinação podem alterar a estrutura da cromatina local e regular a transcrição, reparo, recombinação e replicação. Proteínas não histonas associadas à cromatina são um grupo diversificado, com milhares de tipos diferentes de proteínas, incluindo fatores de transcrição, polimerases, receptores hormonais e outras enzimas nucleares.

Metilação do DNA

A metilação do DNA é um mecanismo epigenético importante que regula o silenciamento gênico, o imprinting de genes, o desenvolvimento embrionário e a estabilidade cromossômica. A metilação do DNA ocorre na posição 5-carbono de resíduos da citosina, principalmente dentro de dinucleotídeos CpG para formar 5-metilcitosinas (5-mC). A reação é catalisada por DNA metiltransferases (DNMTs). Os resíduos de 5-metilcitosinas também podem ser hidroxilados por enzimas TET para formar 5-hidroximetilcitosina (5-hmC), que tem funções diferentes da 5-mC. Fornecemos ferramentas robustas que não apenas lhe possibilitam detectar e quantificar 5-mC e 5-hmC, mas também distinguir com precisão essas modificações.

Kits de imunoprecipitação da cromatina (ChIP)

A detecção quantitativa de modificações de histonas é importante para entender melhor a regulação epigenética de processos celulares em tecidos normais ou cancerosos. A técnica mais amplamente usada para estudar como modificações de histonas e outras proteínas de ligação ao DNA, como fatores de transcrição, influenciam a expressão gênica se chama imunoprecipitação da cromatina (ChIP) combinada com reação em cadeia da polimerase qualitativa (qPCR). A ChIP envolve a reticulação química de proteínas a sequências de DNA, o que é seguido por imunoprecipitação dos complexos reticulados usando anticorpos e esferas para precipitar a histona modificada ou outras proteínas de interesse. As modificações de histonas mais estudadas e compreendidas são acetilação, fosforilação, metilação e ubiquitinação. Modificações de histonas regulam a transcrição, reparo, recombinação e replicação do DNA e podem alterar a arquitetura da cromatina local. Explore nossa ampla gama de kits para analisar padrões complexos de modificações de histonas.

Controle transcricional e pós-transcricional: Regulação de RNA

Tradicionalmente, a pesquisa de expressão gênica se concentrou na regulação da transcrição por meio de interações de fatores de transcrição com sítios de ligação específicos, modificações de histonas dentro da cromatina e dinâmica coordenada da cromatina associadas a mudanças na transcrição gênica. A pesquisa de expressão gênica atual busca entender a dinâmica da regulação de RNA, com o objetivo final de fazer a ponte entre o controle da transcrição e a expressão de proteínas. As proteínas de ligação ao RNA (RBPs) desempenham um papel importante na regulação pós-transcricional da expressão gênica.

Regulação de RNA: Kits de imunoprecipitação de proteínas de ligação ao RNA (RIP)

A RIP pode ser considerada o análogo para o RNA da aplicação de ChIP mais conhecida. A RIP pode ser usada para identificar moléculas específicas de RNA associadas a proteínas de ligação citoplásmica ou nuclear específicas. A RIP começa com a imunoprecipitação de complexos endógenos de proteínas de ligação ao RNA e coisolamento de espécies de RNA associadas ao complexo imunoprecipitado. Após a purificação dessas espécies de RNA, elas podem ser analisadas e identificadas como mRNAs ou RNAs não codificantes por diversas aplicações, incluindo RT-PCR quantitativa, análise de microarranjos (RIP-Chip) e sequenciamento de alto rendimento (RIP-Seq).