P8044

Proteinase K

≥3.0 unit/mg solid, lyophilized powder

• Sinônimo(s): Endopeptidase K
• Número CAS: 39450-01-6
• Número da licença da enzima: 3.4.21.64 (BRENDA, IUBMB)
• Número CE: 254-457-8
• Número MDL: MFCD00132129
• Código UNSPSC: 12352204
• eCl@ss: 32160410
• NACRES: NA.54

Propriedades

• fonte biológica: maize; microbial (T.album; T. ALBUM); plant seeds (barley); soybean; yeast
• Nível de qualidade: 200
• Formulário: lyophilized powder
• atividade específica: ≥3.0 unit/mg solid
• peso molecular: 28.93 kDa
• composição: Protein, ≥15% biuret
• técnica(s): DNA extraction: suitable
• aplicação(ões): diagnostic assay manufacturing
• temperatura de armazenamento: −20°C

Descrição

Aplicação

Útil na inativação proteolítica de nucleases durante o isolamento de DNA e RNA.

Útil na inativação proteolítica de nucleases durante o isolamento de DNA e RNA.
Remove endotoxinas que se ligam a proteínas catiônicas, como lisozima e ribonuclease A.
Segundo relatos, é útil no isolamento de mitocôndrias de fígado, levedura e feijão-mungo
Determinação da localização de enzimas em membranas
Tratamento de cortes de tecido embebidos em parafina para expor sítios de ligação a antígenos para marcação com anticorpos.
Digestão de proteínas de amostras de tecido cerebral para obter príons para pesquisa em encefalopatias espongiformes transmissíveis (EET).

Proteinase K is useful for the proteolytic inactivation of nucleases during the isolation of DNA and RNA. It is used for the removal of endotoxins bound to cationic proteins such as lysozyme and ribonuclease A. It is also useful for the isolation of hepatic, yeast, and mung bean mitochondria and is used to determine enzyme localization on membranes. Furthermore, it is used for the treatment of paraffin embedded tissue sections to expose antigen binding sites and for digestion of proteins from brain tissue samples. Product P8044 is provided as a lyophilized powder[1].

The enzyme from Sigma has been used to degrade complex I (NADH:ubiquinone oxidoreductase) prior to extraction of ubiquinone from Yarrowia lipolytica.[2] It has been used to examine the effect of Proteinase k on Pythium ultimum.[3] It has also been used to maximize the variety of peptide bonds hydrolyzed in the sediment slurry without autolytic production of amino acids from the enzyme itself.[4]

Ações bioquímicas/fisiológicas

A proteinase K é uma protease de serina estável e altamente reativa. Evidências provenientes de estudos da estrutura cristalina e molecular indicam que a enzima pertence à família das subtilisinas, com uma tríade catalítica no sítio ativo (Asp³⁹-His⁶⁹-Ser²²⁴). Ela é estável em uma ampla variedade de ambientes: pH, sais tamponantes, detergentes (SDS) e temperatura. Na presença de SDS a 0,1%-0,5%, a proteinase K retém sua atividade e digere diversas proteínas e nucleases em preparados de DNA, sem comprometer a integridade do DNA isolado.

Proteinase K is highly active towards native proteins. It has a broad specificity and degrades many proteins even in the native state. It mainly cleaves the peptide bond adjacent to the carboxyl group of aliphatic and aromatic amino acids with blocked α-amino groups.[5][6][7] The optimum pH is between 7.5-9.0[5][6] and the isoelectric point is 8.9.[5] Ca²⁺ (1-5 mM) is required for activation. Proteinase K is inhibited by diisopropyl fluorophosphate (DFIP), and phenylmethanesulfonyl fluoride (PMSF).[6]

Definição da unidade

One unit will hydrolyze urea-denatured hemoglobin to produce color equivalent to 1.0 μmole of tyrosine per min at pH 7.5 at 37 °C (color by Folin-Ciocalteu reagent).

Informações de segurança

• Pictogramas: GHS08,GHS07
• Palavra indicadora: Danger
• Frases de perigo: H315,H319,H334,H335
• Declarações de precaução: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Classificações de perigo: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Órgãos-alvo: Respiratory system
• Código de classe de armazenamento: 11 - Combustible Solids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 1
• Ponto de fulgor (°F): Not applicable
• Ponto de fulgor (°C): Not applicable
• Equipamento de proteção individual: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves