RPROTK-RO

Proteinase K, recombinante, grau para PCR

Lyophilizate from Pichia pastoris

• Número CE: 3.4.23.1 (BRENDA, IUBMB)
• NACRES: NA.21
• UNSPSC Code: 12352204
• Specific activity: ~2 units/mg protein

Propriedades

• form: lyophilized
• specific activity: ~2 units/mg protein
• packaging: pkg of 100 mg (03115879001), pkg of 25 mg (03115836001), pkg of 2 × 250 mg (03115801001), pkg of 4 × 250 mg (03115852001)
• manufacturer/tradename: Roche
• pH range: 4.0-12.5
• storage temp.: 2-8°C

Descrição

General description

A proteinase K é uma protease de serina relacionada à subtilisina. A enzima recombinante é idêntica à protease nativa isolada originalmente do bolor Tritirachium album. As especificações da enzima recombinante são as mesmas que as da protease nativa. A sequência de aminoácidos (peso molecular) e a estrutura molecular são idênticas. Porém, o preparado recombinante é muito mais puro que a enzima nativa, porque é livre de DNA e não tem especificidade pronunciada de clivagem. A enzima é extremamente eficaz em proteínas nativas, portanto pode ser usada para inativar rapidamente nucleases endógenas, como RNases e DNases. A enzima também está disponível como solução.

• Inibidores: A enzima é inativada por Pefabloc^® SC. Porém, ela não é inativada por íons metálicos, agentes quelantes (como EDTA), reagentes sulfidrila ou inibidores de tripsina e quimotripsina.
• Ativadores: A atividade da proteinase K é estimulada pela presença de agentes desnaturantes (SDS e ureia).
• pH ideal: A proteinase K é estável em uma ampla faixa de pH (4-12,5). A enzima mantém atividade total por várias horas se incubada em pH entre 6,5 e 9,5.
• Atividade por volume:

Aproximadamente 2,5 U/mg de liofilizado (ensaio de cromoenzima)
Aproximadamente 30 U/mg de liofilizado (ensaio de hemoglobina)

Observação: O SDS pode aumentar em até sete vezes a atividade da proteinase K.

Aproximadamente 2,0 U/mg de liofilizado (2,5 U/mg de proteína) quando testado com o ensaio Chromozym (equivalente a 24 U/mg de liofilizado [30 U/mg de proteína] com o ensaio de hemoglobina).

Application

A proteinase K é uma das endopeptidases mais ativas conhecidas. A proteinase K de grau para PCR é especialmente adequada para isolar ácidos nucleicos para reações de amplificação, além de:

• A enzima é extremamente eficaz em proteínas nativas, portanto pode ser usada para inativar rapidamente nucleases endógenas, como RNases e DNases, durante o isolamento de ácidos nucleicos. Essa propriedade torna a proteinase K especialmente adequada para o isolamento de RNA e DNA nativo de tecidos ou linhagens celulares.
• A enzima promove a lise celular por meio da ativação de um fator autolítico bacteriano.
• A proteinase K é usada para analisar estruturas de membrana por meio da modificação de proteínas e glicoproteínas nas superfícies das células.
• Dado que a enzima é testada quanto à ausência de RNases e DNases e é praticamente isenta de DNA, ela é especialmente adequada para isolar moldes de PCR e RT-PCR.
• A proteinase K também pode ser usada para remover restos celulares durante a retirada de amostras de colônias de culturas em placas ("colony lifts") e para tratar cortes de tecido para garantir uma infiltração eficiente de sonda durante a hibridização in situ.

Biochem/physiol Actions

A proteinase K é uma das endopeptidases mais ativas conhecidas e não exibe especificidade de clivagem acentuada. A proteinase K cliva proteínas da seguinte forma: X-↓-Y, onde X = aminoácido alifático, aromático ou hidrofóbico e Y = qualquer aminoácido. A enzima pode quebrar o material proteico em aminoácidos livres, se usada em grande excesso e por longos períodos de incubação.

Features and Benefits

A proteinase K é uma protease de serina que não tem especificidade de clivagem acentuada. Ela cliva proteínas entre aminoácidos X e Y (X-↓-Y), onde X = um aminoácido alifático, aromático ou hidrofóbico e Y = qualquer aminoácido. A enzima é extremamente eficaz em proteínas nativas, portanto pode ser usada para inativar rapidamente nucleases endógenas, como RNases e DNases.

• Escolha uma ferramenta eficaz para preparação do molde. Inative DNases e RNases da maioria das espécies.
• Conte com qualidade e desempenho consistentes. Testes rigorosos de qualidade garantem estabilidade ideal e desempenho de alto nível de lote a lote.
• Prepare amostras em uma ampla gama de condições. A enzima robusta é estável em uma ampla faixa de pH e é ideal para diversas aplicações.
• Beneficie-se de uma enzima sem contaminação. A enzima é testada quanto à ausência de RNases e DNases e é praticamente isenta de DNA. Ela é especialmente adequada para o isolamento de moldes de PCR.

Observação: A enzima pode reduzir a proteína em aminoácidos livres, se estiverem excessivamente presentes para períodos de incubação prolongados.

Conteúdo
A proteinase K de grau para PCR liofilizada também está disponível em solução.

Preparation Note

Ativador: Para estimular a atividade da proteinase K, adicione agentes desnaturantes (SDS e ureia). Por exemplo, o SDS pode aumentar em até sete vezes a atividade da proteinase K em comparação com a atividade exibida na ausência de SDS.
Solução de trabalho: Para obter melhores resultados, dissolva a proteinase K recombinante, de grau para PCR, em água bidestilada ou tampão Tris. O melhor tampão para a proteinase K varia de acordo com a aplicação. Siga sempre as orientações de pH e temperatura no campo de parâmetro. De modo geral, a proteinase K é estável e muito ativa em tampões que contêm reagentes desnaturante, como ureia, dodecil sulfato de sódio (SDS) e sais de guanidina.
Condições de armazenamento (solução de trabalho): -15 ºC a -25 °C

Reconstituição em água bidestilada no mínimo até 20 mg/ml

Analysis Note

Este preparado não contém RNases, DNases e DNA, segundo os procedimentos de controle de qualidade atuais.

• Ausência de nucleases: Cada lote é testado em diversos substratos para assegurar a ausência de atividade de endonuclease, exonuclease, ribonuclease e corte (“nicking”).
• Conteúdo de DNA: =10 pg/mg de enzima (determinado por limiarização)
• Biocarga: <125 ufc/g (determinada pelo teste mais rigoroso da Farmacopeia Europeia, que identifica o número total de bactérias aeróbicas, leveduras e fungos viáveis)

Other Notes

Somente para fins de pesquisas biológicas. Não é destinado ao uso em procedimentos diagnósticos.
A proteinase K de grau para PCR liofilizada também está disponível em solução.

Legal Information

Pefabloc is a registered trademark of Pentapharm

Informações de segurança

• Pictogramas: GHS07,GHS08
• Palavra de aviso: Danger
• Declarações de precaução: P261 - P264 - P280 - P284 - P304 + P340 + P312 - P342 + P311
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - Skin Sens. 1 - STOT SE 3
• Órgãos-alvo: Respiratory system
• Classe de armazenamento: 11 - Combustible Solids
• O que está acontecendo?: WGK 1
• Ponto de inflamação (°F): does not flash
• Ponto de inflamação (°C): does not flash
• Códigos de risco: H315,H317,H319,H334,H335