KCQS07

Mistura para RT-qPCR KiCqStart^® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix^™

for Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, Illumina, Corbett, and Roche systems

• Sinônimo(s): Mistura para RT-qPCR KiCqStart^® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix^™
• Código UNSPSC: 41106300
• NACRES: NA.55

Propriedades

• Formulário: liquid
• uso: sufficient for 500 reactions
• Características: dNTPs included; hotstart
• condição de armazenamento: protect from light
• técnica(s): qPCR: suitable
• cor: light blue
• entrada: purified RNA
• compatibilidade: Bio-Rad CFX384; Bio-Rad CFX96; Bio-Rad MJ Chromo4; Bio-Rad MJ Opticon 2; Bio-Rad MJ Opticon; Bio-Rad MiniOpticon; Eppendorf^® Mastercycler ep realplex2 s; Eppendorf^® Mastercycler ep realplex; Illumina Eco qPCR; Qiagen Corbett Rotor-Gene 3000; Qiagen Corbett Rotor-Gene 6000; Qiagen Corbett Rotor-Gene Q; Roche LightCycler 480
• método de detecção: probe-based
• Condições de expedição: dry ice
• temperatura de armazenamento: −20°C

Descrição

Descrição geral

A mistura para RT-qPCR KiCqStart^® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix^™é uma mistura-mestre pronta para uso e altamente sensível para PCR quantitativa com transcrição reversa (RT-qPCR) de moldes de RNA usando produtos químicos para detecção por sondas de hibridização, como sondas de hidrólise de 5′ TaqMan^®, em sistemas de PCR em tempo real (vide a seção de compatibilidade com instrumentos para selecionar o reagente adequado para o seu equipamento). A síntese da primeira fita de cDNA e a amplificação de PCR são realizadas no mesmo tubo, sem que seja aberto entre os procedimentos. Ela é ideal para quantificação altamente sensível de vírus de RNA ou alvos de RNA pouco abundantes, bem como estudos de expressão gênica de alto rendimento. O sistema foi otimizado para oferecer máxima eficiência, sensibilidade e especificidade de RT-PCR em volumes de reação reduzidos e ciclos de rápida duração.

A mistura para RT-qPCR KiCqStart^® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix^™contém todos os componentes necessários para RT-qPCR, exceto o molde de RNA e a sonda. Ela é compatível com todas as composições químicas de sondas duplamente marcadas. A transcriptase reversa é um M-MLV (vírus da leucemia murina de Moloney) modificado, com atividade reduzida de RNase H e maior atividade e estabilidade em temperaturas mais altas. O uso de temperaturas mais altas (50 ºC a 55 °C) na etapa da primeira fita da RT-qPCR em etapa única proporciona maior especificidade para hibridização do primer e rompimento da estrutura secundária do RNA que pode interferir na síntese de cDNA.

A mistura para RT-qPCR KiCqStart^® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix^™ é altamente resistente a inibidores de PCR. Um componente-chave da mistura ReadyMix^™ é uma DNA polimerase ultrapura, altamente processiva e termoestável, que é combinada com anticorpos monoclonais com avidez elevada. Isso proporciona uma reação hot start automática extremamente rigorosa que minimiza o potencial de formação de dímeros de primer e outros artefatos de PCR não específicos. A cor azul-claro do corante inerte simplifica a montagem da reação em placas brancas ou transparentes e ajuda a minimizar erros de pipetagem ou mistura. O corante não interfere no desempenho de qPCR nem afeta a estabilidade do produto.

Aplicação

O KiCqStart^® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix^™ foi usado:

• na reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qRT-PCR) para estudos de expressão gênica[1][2][3][4]
• na análise de transcrição específica do tipo de célula para determinar o valor do limiar do ciclo (Ct)[5]
• para detecção do RNA do coronavírus 2 da síndrome respiratória aguda grave (SARS-CoV-2) em swabs nasofaríngeos[6]e orofaríngeos[7]
• para amplificação de cDNA transcrito reversamente[8]

Características e benefícios

• Resultados de ensaio em apenas 33 minutos
• Resultados de PCR em tempo real altamente eficientes e sensíveis
• Pouca/nenhuma otimização necessária

Componentes

Tampão de reação 2X que contém dATP, dCTP, dGTP, dTTP, cloreto de magnésio, transcriptase reversa, proteína inibidora de RNase, DNA polimerase para hot-start, corante de qPCR azul inerte e estabilizantes

embalagem:
500 reações* = 5 X tubos de 1 ml
*número de reações com base em um volume de 20 ul

Outras notas

Diferentes sistemas de PCR em tempo real empregam diferentes estratégias para normalização de sinais fluorescentes e correção de variações ópticas de um poço para outro. É fundamental associar o reagente de qPCR adequado ao seu instrumento específico. A mistura para RT-qPCR KiCqStart^® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix^™ não contém um corante de referência interno. Instrumentos compatíveis incluem:

• CFX384 da Bio-Rad^®™
• CFX96 da Bio-Rad^™
• MiniOpticon da Bio-Rad^™
• Chromo4 da Bio-Rad/MJ^™
• Opticon 2 da Bio-Rad/MJ
• Opticon da Bio-Rad/MJ^™
• SmartCycler da Cepheid^®
• Eppendorf Mastercycler^® ep realplex
• Eppendorf Mastercycler ep realplex2 s
• Eco de qPCR da Illumina
• Rotor-Gene^® 3000 da Qiagen/Corbett
• Rotor-Gene 6000 da Qiagen/Corbett• Rotor-Gene Q da Qiagen/Corbett
• LightCycler^® 480 da Roche

Informações legais

Bio-Rad is a registered trademark of Bio-Rad Laboratories, Inc.

CFX384 is a trademark of Bio-Rad Laboratories, Inc.

CFX96 is a trademark of Bio-Rad Laboratories, Inc.

Chromo4 is a trademark of Bio-Rad Laboratories, Inc.

Eppendorf is a registered trademark of Eppendorf AG

KiCqStart is a registered trademark of QIAGEN Beverly Inc.

LightCycler is a registered trademark of Roche

Mastercycler is a registered trademark of Eppendorf AG

MiniOpticon is a trademark of Bio-Rad Laboratories, Inc.

Opticon is a trademark of Bio-Rad Laboratories, Inc.

ReadyMix is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC

Rotor-Gene is a registered trademark of Qiagen GmbH

SmartCycler is a registered trademark of Cepheid, Inc.

TaqMan is a registered trademark of Roche Molecular Systems, Inc.

Informações de segurança

• Código de classe de armazenamento: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 3
• Ponto de fulgor (°F): Not applicable
• Ponto de fulgor (°C): Not applicable