BGALS-RO

β-Glicuronidase

from E. coli K 12

• Número da licença da enzima: 3.2.1.31 (BRENDA, IUBMB)
• Código UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.28

Propriedades

• fonte biológica: Escherichia coli K12
• Nível de qualidade: 100
• forma: solution
• peso molecular: M_r ~220 kDa
• embalagem: pkg of 1 mL (03707580001); pkg of 15 mL (03707601001); pkg of 5 mL (03707598001)
• fabricante/nome comercial: Roche
• condição de armazenamento: (Keep container tightly closed in a dry and well-ventilated place.)
• Parâmetros: 48 °C optimum reaction temp.
• técnica(s): activity assay: suitable
• cor: colorless
• pH ideal: 6.0-6.5
• solubilidade: water: soluble
• adequação: suitable for enzyme test
• nº de adesão UniProt: ; P05804
• aplicação(ões): detection; sample preparation
• temperatura de armazenamento: 2-8°C
• Informações sobre genes: Escherichia coli ... uidA(946149)

Descrição

Descrição geral

Glucuronidase a 25 °C, ou 140 U/mg a 37 °C, em pH 7 com 4-nitrofenil-β-D-glicuronídeo como substrato; 1 ml β-glucuronidase contém pelo menos 140 U a 37 °C.

Especificidade

Cliva o ácido glicurônico terminal, que é β-ligado a mono-, oligo- ou polissacarídeos ou fenol.

Aplicação

As β-glicuronidases vêm sendo usadas extensamente em laboratórios de pesquisa e de análise para hidrólise enzimática de β-glicuronídeos esteroides. A β-glucuronidase é usada:

• para a hidrólise de conjugados de esteroides (glucuronídeos) na urina (pH 6,0–6,5)
• na análise de dopagem
• para a detecção de benzodiazepínicos em pequenas doses.
• Durante a preparação da amostra, para clivar glucuronídeos antes de GC-MS, HPLC, imunoensaios ou outros métodos analíticos.

Tem sido usado para a hidrólise de enterolactona plasmática, testosterona e glucuronídeo de epitestosterona.

Ações bioquímicas/fisiológicas

A glicuronidação é um dos princípios básicos do metabolismo. Muitas substâncias apresentadas ao corpo humano são submetidas a processamento metabólico que inclui conjugação com ácido glicurônico por UDP-glicuronosiltransferases (UGTs). βA β-glicuronidase, também conhecida como β-D-glicuronosida glicuronoso-hidrolase, catalisa a transferência de um grupo glicuronil para várias moléculas endógenas e exógenas biológicas e farmacologicamente ativas. O glicuronídeo é, em geral, mais solúvel, menos tóxico e excretado com maior facilidade pelo corpo humano em comparação com a molécula original. Para analisar esses conjugados de medicamentos presentes nos fluido corporais, como urina e plasma, é necessário desconjugar o glicuronídeo. A hidrólise enzimática antes da detecção é essencial para atingir alta sensibilidade durante a análise. Após a hidrólise, a amostra pode ser analisada por espectrometria de massa, cromatografia gasosa, HPLC, imunoensaios ou outros métodos analíticos.

Características e benefícios

βA β-glicuronidase de E. coli é altamente específica para β-glicuronídeos, e é capaz de hidrolisar muito rapidamente β-glicuronídeos esteroides, além de clivar muitos outros tipos de glicuronídeos, com benzodiazepinas, opioides e canabinoide. βA β-glicuronidase é usada para hidrólise enzimática de glicuronídeos em fluidos biológicos, principalmente urina. As substâncias usadas para testes de doping são conjugadas com glicuronídeos, o que significa que uma análise de doping eficaz depende, com frequência, da clivagem enzimática de moléculas de drogas conjugadas pela β-glicuronidase.

• Realize análise rápida devido à alta especificidade da atividade′ da enzima.
• Faça uma varredura rápida para detecção de esteroides, benzodiazepinas, canabinoides e opioides.
• Economize tempo desenvolvendo o seu procedimento, sem necessidade de limpar a reação ou tamponar a urina.

Definição da unidade

A unidade internacional da atividade da β-glicuronidase é a atividade enzimática que aumenta a taxa de liberação de 4-nitrofenol do 4-nitrofenil-β-D-glicuronídeo (4NPG) em uma temperatura de +25 °C e pH 7,0 por 1 μm.
A unidade de Fishman era usada anteriormente. Essa unidade representa a liberação de fenolftaleína do seu glicuronídeo (PPG). Não é possível medir as atividades relativas de diferentes preparados de β-glicuronídeos esteroides comparando as suas atividades com relação ao PPG. Muitos preparados não catalisam igualmente a hidrólise de PPG, 4NPG ou de vários β-glicuronídeos esteroides na urina. A escolha do 4NPG como substrato padrão é baseada nas seguintes considerações:

• As concentrações de Michaelis para os dois substratos são semelhantes (K_M = 2 ×10^-4 M para o 4 NPG ed K_M = 6 ×10^-5 M para o PPG), mas as taxas correspondentes de hidrólise diferem:
• O 4NPG é hidrolisado cerca de 5 × mais rápido que o PPG;
• Para o PPG, há inibição por excesso de substrato, o que não é observado com o 4NPG.

forma física

Solução em glicerol 50%, com pH de cerca de 6,5
(15 ml em um frasco)

Outras notas

A enzima β-glicuronidase de E. coli essencialmente não tem atividade de sulfatase e é particularmente eficaz na clivagem de conjugados de esteroides e benzodiazepinas.
Somente para fins de pesquisas biológicas. Não é destinado ao uso em procedimentos diagnósticos.

Informações legais

A venda do Produto não esgota nem confere nenhum direito em patentes de terceiros, inclusive patentes das empresas do grupo de empresas F. Hoffmann - La Roche AG, especificamente, para o uso de anticorpos modificados obtidos usando o produto.

Informações de segurança

• Código de classe de armazenamento: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 1
• Ponto de fulgor (°F): No data available
• Ponto de fulgor (°C): No data available