SAB4200701

Anti-CRISPR/Cas9-Antikörper, monoklonaler Antikörper der Maus

clone 7A9-3A3, purified from hybridoma cell culture

• Synonym(e): CRISPR-assoziierte Protein-9-Nuklease, Crisper, Crispr-RNA
• UNSPSC-Code: 12352203
• NACRES: NA.41

Eigenschaften

• Biologische Quelle: mouse
• Qualitätsniveau: 200
• Antikörperform: purified from hybridoma cell culture
• Antikörper-Produkttyp: primary antibodies
• Klon: 7A9-3A3, monoclonal
• Form: buffered aqueous solution
• Verpackung: antibody small pack of 25 μL
• Konzentration: ~1 mg/mL
• Methode(n): immunoblotting: 1-2 μg/mL using whole extracts of human HEK-293T cells over-expressing CAS9 protein; immunofluorescence: 1-2 μg/mL using human HEK-293T cells over-expressing CAS9 protein.; immunoprecipitation (IP): 5-10 μg using whole extract of human HEK-293T cells over-expressing CAS9 protein
• Isotyp: IgG1
• Versandbedingung: dry ice
• Lagertemp.: −20°C
• Posttranslationale Modifikation Target: unmodified

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

CAS9, auch bekannt als mit CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) assoziierte Protein-9-Nuklease, cas5 und csn1, ist das Signatur-Gen des Typ-II-CRISPR-RuvC-Cas-Systems (RNase-H-Faltung). CAS9 enthält 1388 Aminosäuren. Dieses Protein soll eine RuvC/Ribonuklease-H-Domäne (RNase) enthalten, die an der crRNA-Reifung beteiligt ist, sowie eine McrA/HNH-Signaturdomäne, die am DNA-Abbau beteiligt ist.

CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) gehört zum Typ-II-CRISPR/CAS9-System. Es ist Teil eines adaptiven Immunsystems des Streptococcus pyogenes SF370 und schützt vor pathogenen Zielgenen, indem es die fremde DNA sequenzabhängig spaltet.2 Das Typ-II-CRISPR/Cas-System, das an die Expression in eukaryotischen Zellen angepasst wurde, besteht aus vier Genen, darunter die Cas9-Nuklease (CRISPR-assoziierte Proteine), zwei nicht kodierende CRISPR-RNAs (crRNAs oder gRNA), eine transaktivierende crRNA (tracrRNA) und ein Vorläufer-crRNA-Array (pre-crRNA-Array). Die pre-crRNA enthält Nuklease-Führungssequenzen (Spacers), die von identischen direkten Wiederholungen (DRs) unterbrochen werden.
Die Cas9-Endonuklease kann mit einer einzelnen gRNA, die einen DNA-Doppelstrangbruch (DSB) an einer gewünschten Genomstelle steuert, gentechnisch verändert werden. Ähnlich wie bei DBS, die durch Zinkfingernukleasen (ZFN) ausgelöst werden, aktiviert die Zelle anschließend die körpereigenen DNA-Reparaturprozesse, entweder die NHEJ-Reparatur (non-homologous end-joining) oder die HDR-Reparatur (homology-directed repair), um den entsprechenden DSB zu heilen. Im Vergleich zu anderen Genome-Editing-Technologien wie Designer-Zinkfingern (ZFs), transkriptionsaktivatorähnlichen Effektoren (TALEs) und Homing-Meganukleasen ist das CRISPR/CAS9-System ein skalierbares, kostengünstiges und einfach zu entwickelndes System. Daher kann der Anti-CRISPR/CAS9-Antikörper ein nützliches Instrument zum Nachweis von CRISPR/CAS9-positiv transfizierten Zellen sowie zur Aufdeckung von DSB-Stellen im Genom und in ChIP-bezogenen Assays (ChIP: Chromatin Immunoprecipitation) sein.

Immunogen

ein rekombinantes Protein innerhalb der N-terminalen Region von Streptococcus pyogene Cas9

Anwendung

Monoklonales Anti-CRISPR/CAS9 erkennt Überexpressionssysteme, die ein CAS9-Konstrukt enthalten. Der Antikörper erkennt mutierte Cas9-Varianten, einschließlich Nickase Cas9 und Dead Cas9 (dCas9). Der Antikörper kann bei verschiedenen immunchemischen Verfahren, zum Beispiel Immunblotting, Immunfluoreszenz und Immunpräzipitation, eingesetzt werden. Monoklonales Anti-CRISPR/CAS9 verursacht keine Kreuzreaktion mit FnCas9 aus Francisella-novicida-Bakterien und Cpf1-Proteinen aus Acidaminococcus sp. (Stamm BV3L6) und Lachnospiraceae-Bakterium ND2006.

Biochem./physiol. Wirkung

CAS9 spielt bei der Plasmid-DNA-Interferenz eine wichtige Rolle. Es ist das einzige Cas-Protein, das für die Resistenz gegenüber Fremd-DNA benötigt wird. CAS9 stimuliert sowohl das RNA-gesteuerte Genome Editing als auch die Genregulierung in verschiedenen Organismen, kann jedoch immer nur eine dieser Aktivitäten in der jeweiligen Zelle fördern.

Physikalische Form

Erhältlich als Lösung in 0,01 M phosphatgepufferter Kochsalzlösung, pH 7,4, mit 15 mM Natriumazid als Konservierungsmittel.

Lagerung und Haltbarkeit

Für regelmäßige Verwendung bei 2 bis 8 °C bis zu 1 Monat lang aufbewahren. Zur Langzeitlagerung in Arbeitsaliquoten einfrieren. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen wird nicht empfohlen. Falls nach längerer Lagerung eine leichte Trübung eintritt, ist die Lösung vor Gebrauch durch Zentrifugieren zu klären. Nicht verwendete Arbeitsverdünnungen sollten nach 12 Stunden verworfen werden.

Sonstige Hinweise

Das Produkt ist nur für Forschungs- und Entwicklungszwecke bestimmt und nicht für Arzneimittelanwendungen, häuslichen Gebrauch oder sonstige Zwecke vorgesehen.
Um mit verschiedenen Methoden und Zubereitungen die besten Ergebnisse zu erzielen, empfehlen wir die Bestimmung einer optimalen Arbeitskonzentration durch einen Titrationstest.

Haftungsausschluss

Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden. Diese umfassen insbesondere die nicht autorisierte kommerzielle Verwendung, In-vitro-Diagnostik-Zwecke, Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable