The recommended sample volume is 10 microliters. The higher concentration of 5 mM that was mentioned corresponds to 50 nanomoles. This would be near the upper limit of the assay.
Bioluminescent ATP assays are very sensitive and accurate over a broad range of the amount of ATP; nanomole and even picomole amounts of ATP can be determined. So, a 5 millimolar sample could be diluted 1000X to 5 micromolar and still give good results, and likely better results than the 5 mM sample.
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MAK135
Assay-Kit zur Untersuchung des ADP/ATP-Verhältnisses
sufficient for 100 tests (bioluminescent)
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About This Item
UNSPSC-Code:
12161503
NACRES:
NA.84
Empfohlene Produkte
Verwendung
sufficient for 100 tests (bioluminescent)
Anwendung(en)
pharmaceutical
Nachweisverfahren
chemiluminescent
Relevante Krankheit(en)
cancer
Lagertemp.
−20°C
Allgemeine Beschreibung
Änderungen des ADP/ATP-Verhältnisses wurden zur Differenzierung verschiedener Formen des Zelltods und der Zelllebensfähigkeit verwendet. Erhöhte ATP-Werte und verringerte ADP-Werte deuten auf proliferierende Zellen hin. Im Gegenzug dazu weisen verringerte ATP-Werte und erhöhte ADP-Werte auf apoptische und nekrotische Zellen hin, wobei die Abnahme an ATP und der Anstieg an ADP im Fall einer Nekrose wesentlich ausgeprägter ist als bei der Apoptose.
Anwendung
- LOC554202 contributes to chordoma progression by sponging miR-377-3p and up-regulating SMAD3.: In diesem Artikel werden die molekularen Mechanismen untersucht, durch die LOC554202 das Fortschreiten des Chordoms durch die Regulierung von miR-377-3p und SMAD3 fördert. Das ADP/ATP-Ratio-Assay-Kit wurde verwendet, um die metabolischen Auswirkungen dieser molekularen Veränderungen auf die Zellviabilität und -proliferation zu beurteilen (Xu et al., 2023).
- FOXG1 improves mitochondrial function and promotes the progression of nasopharyngeal carcinoma.: In dieser Studie wird untersucht, wie FOXG1 die mitochondriale Funktion verbessert und somit das Fortschreiten des Nasopharyngealkarzinoms fördert. Das ADP/ATP-Ratio-Assay-Kit wurde zur Messung der mitochondrialen Funktion und der Veränderungen des Energiestoffwechsels eingesetzt, was einen Einblick in das bioenergetische Profil von Krebszellen ermöglicht (Xi et al., 2021).
Leistungsmerkmale und Vorteile
Kompatibel mit Handhabungssystemen mit hohem Durchsatz.
Eignung
Eignet sich zum Nachweis von Apoptose und Nekrose in Zellen und zur Untersuchung der Auswirkungen von Verbindungen auf die Zellproliferation.
Prinzip
Das Assay-Kit zur Untersuchung des ADP/ATP-Verhältnisses ermöglicht ein einfaches und direktes Verfahren zur Messung der ADP- und ATP-Werte in Zellen zwecks Screening von Apoptose, Nekrose und Zellproliferation. Der Assay umfasst zwei Schritte. Im ersten Schritt werden die Zellen durch das Arbeitsreagenz lysiert, um ATP und ADP freizusetzen. In Gegenwart von Luciferase reagiert ATP sofort mit dem Substrat D-Luciferin und produziert Licht. Die Lichtintensität ist ein direktes Maß der intrazellulären ATP-Konzentration.
Luciferase
ATP + D-Luciferin + O2 ----------> Oxyluciferin + AMP + PPi + CO2 + Licht
Im zweiten Schritt wird ADP durch eine Enzymreaktion in ATP umgewandelt. Das neu gebildete ATP reagiert dann wie im ersten Schritt mit dem D-Luciferin. Die zweite gemessene Lichtintensität gibt die gesamte ADP- und ATP-Konzentration der Probe an.
Luciferase
ATP + D-Luciferin + O2 ----------> Oxyluciferin + AMP + PPi + CO2 + Licht
Im zweiten Schritt wird ADP durch eine Enzymreaktion in ATP umgewandelt. Das neu gebildete ATP reagiert dann wie im ersten Schritt mit dem D-Luciferin. Die zweite gemessene Lichtintensität gibt die gesamte ADP- und ATP-Konzentration der Probe an.
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Beschreibung
Preisangaben
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Warning
H-Sätze
Gefahreneinstufungen
Aquatic Chronic 3 - Skin Sens. 1
Lagerklassenschlüssel
10 - Combustible liquids
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What is the appropriate concentration range for the assay? Can I use it to test the ADP/ATP ratio in buffer (~ 0.5 - 5 mM ATP and ADP)?
1 answer-
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Can I please see the product insert and instruction for use for product codeMAK135 ADP/ATP Ratio Assay kit
1 answer-
Here is a link to the product protocol. It can also be found in the 'Documentation' section of the product page: https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/135/374/mak135bul.pdf
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Can the cells be stored in a freezer for future use with the MAK135-1KT ADP/ATP Ratio Assay Kit? Should the same approach recommended for tissue testing, involving snap freezing the tissue in liquid nitrogen and deproteinizing it to inactivate residual ATPases, be followed for testing cells?
1 answer-
The approach for cells is similar to that for tissue samples, but with some differences. It is suggested to liquid nitrogen snap freeze the cells in DMSO to prevent cell lysis. Since these are cells, a deproteination step is not necessary. After thawing, the cells should be washed to remove the DMSO and replaced with PBS. Adding a phosphatase inhibitor such as sodium orthovanadate to the PBS can help limit undesired ATPase activity. It is advisable to resuspend the cells in an amount of PBS that allows them to dispense 10^3-10^4 cells in 10 uL sample volumes, as per the ELDT protocol. Quick work is advised, especially after thawing, to initiate the assay, as snap freezing and thawing the cells can stress them. It's preferable to assay freshly harvested cells over snap freezing, as the kit has only been tested on fresh cells.
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How should this item be used on tissue samples? What is the preparation process and what type of buffer should be used?
1 answer-
Given the relatively unstable nature of ATP, if immediate processing of the tissue and running the assay is not feasible after harvesting the tissue, it is advisable to snap freeze the tissue in liquid nitrogen. Prior to utilizing the tissue in the assay, it is recommended to deproteinate the tissue to deactivate any residual ATPases. This process involves initially homogenizing the tissue on ice in PBS + 1 mM EDTA + 0.5% Triton X100, deproteinating samples with TCA, then neutralizing to pH 7 with KOH. Following this, the sample should be centrifuged and the clear supernatant utilized for the assay. An alternative method involves using a 10 kDa spin column for the lysate.
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