As mentioned in the 'DESCRIPTION'' section, under 'Preparation Note', a solution of collagenase can be prepared at 1-2 mg/mL in TESCA buffer (containing 50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4 at 37°C).
C9407
Collagenase aus Clostridium histolyticum
powder, Suitable for the digestion and isolation of physiologically active pancreatic islet cells, suitable for cell culture
Synonym(e):
Clostridiopeptidase A
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Über diesen Artikel
CAS-Nummer:
UNSPSC Code:
12352204
NACRES:
NA.75
EC Number:
232-582-9
MDL number:
Specific activity:
≥800 units/mg solid
Biological source:
Clostridium histolyticum
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Unterstützung erhaltenpH
7.4
biological source
Clostridium histolyticum
form
powder
specific activity
≥800 units/mg solid
mol wt
68-130 kDa
packaging
pkg of 1 μmol
technique(s)
cell culture | mammalian: suitable
storage temp.
−20°C
Quality Level
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|---|---|---|---|
| technique(s) cell culture | mammalian: suitable | technique(s) - | technique(s) - | technique(s) cell culture | mammalian: suitable |
| biological source Clostridium histolyticum | biological source Clostridium histolyticum | biological source Clostridium histolyticum | biological source Clostridium histolyticum |
| specific activity ≥800 units/mg solid | specific activity ≥125 CDU/mg solid, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid | specific activity ≥125 CDU/mg solid, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid | specific activity ≥4 FALGPA units/mg solid, ≥700 CDU/mg solid (CDU = collagen digestion units) |
| form powder | form powder | form powder | form powder |
| pH 7.4 | pH - | pH - | pH 7.4 |
| storage temp. −20°C | storage temp. −20°C | storage temp. −20°C | storage temp. −20°C |
General description
Kollagenase-Enzym aus Clostridium histolyticum hat Kollagenbindungsdomäne (CBD) und polyzystische nierenerkrankungsartige (PKD-artige) Domänen. Es hat außerdem Ca2+-Bindungsstellen zur Calciumbindung, was für die Funktionalität wichtig ist.[1] Kollagenase wird bei der Behandlung von Bindegewebserkrankungen (Dupuytren-Kontraktur)′ eingesetzt.
Application
Dieses Produkt eignet sich für die Disaggregation von menschlichem Tumorgewebe, Mäusenieren, menschlichem adultem und fötalem Hirngewebe, Lungenepithelgewebe und vielen anderen Epithelgeweben. Es ist ebenfalls bei Leber- und Nierenperfusionsstudien, beim Pankreasverdau, bei der Isolierung von nicht-parenchymalen Rattenleberzellen und der Hepatozytenpräparation wirksam. Kollagenase wird ebenfalls bei der Präparation von Arteriengewebe zur Untersuchung von fortgeschrittenen Glycosylierungsendprodukten (AGE) verwendet. Dieses Enzym wurde für die Freisetzung von Hepatozyten bei einer Konzentration von ca. 1 mg/mL getestet. Konzentrationen für den Verdau liegen zwischen 0,1 und 5 mg/mL.
Kollagenase von Clostridium histolyticum wird beim Verdau folgender Proben eingesetzt:
- Proben zur Isolierung von Langerhans-Inseln
- Pulmonalarterieproben zur Isolierung von pulmonalvaskulären glatten Muskelzellen (PVSMCs)
- Knorpelproben zur Isolierung von Chondrozyten
Biochem/physiol Actions
Collagenase wird durch vier Grammatom Calcium pro Mol Enzym aktiviert. Sie wird durch Ethylenglycol-bis-(beta-aminoethylether)-N, N, N′,N′-tetraessigsäure, β-Mercaptoethanol, Glutathion, Thioglycolsäure und 8-Hydroxychinolin gehemmt.
Das Kollagenase-Produkt ist ein Enzymgemisch, das von C. histolyticum sezerniert wird, wobei unterschiedliche Produkte durch die relativen Verhältnisse der 10-18 Komponenten in den sezernierten Enzymen differenziert werden. Die Hauptkomponenten sind zwei Kollagenasen: Clostripain und eine neutrale Protease. Die synergistische Aktion dieser Enzyme baut Kollagen und andere intrazelluläre Komponenten ab. Die Aktion von Kollagenase-Enzymen sowie der neutralen Protease ist für eine effektive Freisetzung von Zellen aus Gewebe erforderlich. Verschiedene Typen von Kollagen sind die natürlichen Substrate für Kollagenase.
Preparation Note
Dieses Produkt wird aus Kollagenase Typ XI (C7657) von Clostridium histolyticum hergestellt. Es enthält außerdem Clostripain, unspezifische neutrale Protease und tryptische Aktivitäten. Lösungen werden üblicherweise mit 1-2 mg/ml in TESCA-Puffer hergestellt (enthält 50 mM TES, 0,36 mM Calciumchlorid, pH-Wert 7,4 bei 37 °C).
Other Notes
Eine Collagen-Aufschlusseinheit (Collagen Digestion Unit, CDU) setzt Peptide aus Rinder-Achillessehnencollagen entsprechend der Ninhydrin-Anfärbung von 1,0 μmol Leucin in 5 Stunden bei pH 7,4 und 37 °C in Gegenwart von Calciumionen frei. Eine FALGPA-Hydrolyseeinheit hydrolysiert 1,0 μmol Furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala pro Minute bei 25 °C. Eine neutrale Protease-Einheit hydrolysiert die Caseinmenge, die eine Färbung entsprechend 1,0 μmol Tyrosin pro 5 Stunden bei pH 7,5 und 37 °C produziert. Eine Clostripain-Einheit hydrolysiert 1,0 μmol BAEE pro Minute bei pH 7,6 und 25 °C in Gegenwart von DTT.
Disclaimer
Bei Lieferung ist dieses Produkt für die Dauer von einem Jahr bei -20 °C haltbar. Es kommt innerhalb von 30 Tagen bei 37 °C, 50 °C und -20 °C zu keinem Verlust bei der FALGPA- oder Proteaseaktivität. Lösungen von RohKollagenase sind stabil, wenn sie schnell in Aliquoten (10 mg/ml) eingefroren und bei -20 °C tiefgekühlt gelagert werden. Weitere Gefrier-/Auftauzyklen schädigen die Lösung. Bei Lagerung auf Eis behält das Produkt seine gesamte Aktivität über 7 Stunden.
used together
Produkt-Nr.
Beschreibung
Preisangaben
signalword
Danger
hcodes
Hazard Classifications
Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
target_organs
Respiratory system
Lagerklasse
11 - Combustible Solids
wgk
WGK 1
flash_point_f
Not applicable
flash_point_c
Not applicable
ppe
dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves
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Protokolle
To measure collagenase activity, N-(3-[2-Furyl]acryloyl)-Leu-Gly-Pro-Ala is used in a continuous spectrophotometric rate determination at 345 nm. Collagenase hydrolyzes collagen peptide bonds.
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