WESTBL-RO

Western-Block-Reagenz, Lösung

solution, sufficient for 10 blots (11921673001 [100 cm²]), sufficient for 60 blots (11921681001 [100 cm²])

• Synonym(e): Block-Reagenz für Western Blots
• UNSPSC-Code: 12352200

Eigenschaften

• Form: solution
• Qualitätsniveau: 100
• Verwendung: sufficient for 10 blots (11921673001 [100 cm²]); sufficient for 60 blots (11921681001 [100 cm²])
• Verpackung: pkg of 100 mL (11921673001); pkg of 6 × 100 mL (11921681001)
• Hersteller/Markenname: Roche
• Lagertemp.: 2-8°C

Beschreibung

Anwendung

Das Western-Blockierungsreagens wird bei Western-Blot-Experimenten[1][2][3] und in Verfahren der Immunfluoreszenzfärbung als allgemeines Blockierungsmittel verwendet.[4] Das Reagens wird bei Schritten wie dem Blockieren und Waschen von Membranen und dem Verdünnen von Nachweis-Antikörpern verwendet.

Qualität

Jede Charge wird einem Funktionstest (Dot Blot) unterzogen.

Physikalische Form

Das Western-Block-Reagenz ist eine 10x-Lösung mit 10 % aufgereinigtem Casein-Protein in einem Maleinsäurepuffer.

Angaben zur Herstellung

Arbeitslösung: ZUBEREITUNG VON ARBEITSLÖSUNGEN

• Tris-gepufferte Kochsalzlösung (TBS), pH 7,5

800 mL frisch destilliertem Wasser 6,05 g Tris-Base (50 mM) und 8,76 g Natriumchlorid (150 mM) zugeben und mit ca. 9,5 mL 1 M Salzsäure auf pH 7,5 anpassen. Dann mit bidestilliertem Wasser auf 1 L verdünnen. Bei Lagerung bei 2 bis 8 °C ist TBS 3 Monate lang stabil.
Hinweis: Da Natriumazid POD hemmt, darf es bei Einsatz von POD-Konjugaten nicht als antimikrobielles Mittel verwendet werden.

• TBS-Tween (TBST)

Waschpuffer 1: 1 mL Tween 20 in 1 L TBS auflösen. Bei Lagerung bei 2 bis 8 °C ist TBST 3 Monate lang stabil.
Hinweis: 0,1 % Tween 20 eignet sich für die meisten Anwendungen; allerdings können je nach verwendeten Membranen und Antikörpern verschiedene andere Detergenzien (wie SDS, Triton X-100 und Nonidet P40) bei Detergenzkonzentrationen von 0,01 bis 1 % bessere Ergebnisse erzielen.

• Block-Lösung (1 %)

10 mL Western-Block-Reagenz (10x konz.) in 90 mL TBS auflösen. Die Block-Lösung kann bei 2 bis 8 °C 1 Monat lang aufbewahrt werden.
Hinweis: Da Natriumazid POD hemmt, darf es bei Einsatz von POD-Konjugaten nicht als antimikrobielles Mittel verwendet werden.

• Block-Lösung (0,5 %)

50 mL Block-Lösung (1 %) mit 50 mL TBS verdünnen.

• Antikörper-Lösungen

Die Verdünnungs- und Inkubationslösung für alle Antikörper beträgt 0,5 % Block-Reagenz in TBS (siehe oben). Um das gesamte Nachweispotenzial des Systems zu nutzen, empfehlen wir, die Verdünnungen der Primär- und Sekundärantikörper vorab mittels Dot-Blot-Assays zu optimieren. (Verwenden Sie zunächst 3 bis 4 Verdünnungen des Primärantikörpers und eine gleichbleibende Konzentration des zweiten Antikörpers. Wählen Sie dann die am besten geeignete Verdünnung des Primärantikörpers und optimieren Sie auf gleiche Weise die Konzentration des Sekundärantikörpers.)
Hinweis: Die Konzentration des Block-Reagenzes ist ein wichtiger Parameter zur Verbesserung des Signal-Rausch-Verhältnisses in Western Blots. Wenn selbst bei optimierten Antikörperkonzentrationen noch ein hohes Hintergrundsignal vorhanden ist, erhöhen Sie die Konzentration des Block-Reagenzes während der Antikörperinkubationen und Waschschritte von 0,5 % auf 1 %. Wenn selbst bei längeren Antikörperinkubationen nur schwache Signale auftreten, senken Sie die Konzentration des Block-Reagenzes während der Antikörperinkubationen und Waschschritte von 0,5 % auf 0,1 %.

Sonstige Hinweise

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht für den Einsatz in diagnostischen Verfahren geeignet.

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash